PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

【產(chǎn)品名稱】淋病奈瑟菌探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Neisseria gonorrhoeae
【產(chǎn)品編號】YSP6997
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實時熒光PCR儀，可通過實時擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術(shù)，針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計特異性引物和熒光探針，通過實時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實驗方法步驟：
淋病奈瑟菌探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
實驗步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
98%25g5g()二槲皮素106956matrix metalloproteinase 7

 氨培養(yǎng)基 規(guī)格： 100g 用途： 用于鑒別細(xì)菌利用銨鹽作為源并分解葡萄糖的試驗。

白介素21(IL21)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 TMUB2 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

人PSelectincABL1/2(Tyr393/429)  化非受體酪氨激酶cAbl抗體規(guī)格:96T/48T規(guī)格:200mgDeltalike ligand4檢測試盒20mg人黑素瘤細(xì)胞，WM2664細(xì)胞1x10^6cells

98%5g25g刻葉紫堇127184matrix metalloproteinase 3

芹糖甘草苷；甘草苷元-7-O-D-芹糖-4’-O-D-葡萄糖苷 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Liquiritin apioside

補(bǔ)體因子B(CFB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 SUSD4 / Sushi domain-containing protein 4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)*250(g)

人肽盤生長子(PLGF)NFκB p105/p50(PhosphoSer373)  化細(xì)胞核子p50/k基結(jié)合核子抗體規(guī)格:96T/48T規(guī)格:100mgDickkopf 1檢測試盒20mg人橫紋肌瘤細(xì)胞，A673細(xì)胞1x10^6cells

98%500g25gγ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)檢測試劑盒(重氮比色法)Thrombospondin type1 domaincontaining 7A antibody

 胰月示-亞鹽-環(huán)絲氨瓊脂基礎(chǔ)(TSC) 規(guī)格： 100g 用途： 用于食品和臨床樣本中產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)和計數(shù)(SN0177-92，ISO標(biāo)準(zhǔn))。

Recomb Protein G  重組蛋白G進(jìn)口、原裝NaKATP酶檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒4876102

98%5g100gγ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)檢測試劑盒(重氮比色法)phospholipase C δ1

吲哚(standard for GC,>99.5%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,>99.5%(GC) Indole

GSTTag protein  重組谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶現(xiàn)貨供應(yīng)抗酒石性酶5檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒4876102

≥99%25g5gγ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)檢測試劑盒(重氮微板法)phospholipase C

去氫延胡索甲素硝鹽 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 大鼠頜下腺上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Cholesterol  膽固醇*TRAP5檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒487683
淋病奈瑟菌探針法熒光定量PCR試劑盒丹皮新苷 CAS號： 100291869 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

4βD葡萄糖1,3,7三羥 CAS號： 81991993 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

7O杧果苷 CAS號： 31002127 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

北美芹素 CAS號： 13161756 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

丹皮原苷 CAS號： 72520924 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

管花苷A CAS號： 112516059 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

鬧羊花毒素V CAS號： 37720868 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

鬧羊花毒素III CAS號： 26342665 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

鬧羊花毒素ＩＩ CAS號： 26116892 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

11O異酰12O酰通關(guān) CAS號： 1260252183 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

D核糖? CAS號： 50691 規(guī)格： HPLC≥98%;100mg 訂購|咨詢

竹紅菌素 CAS號： 137592268 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

原偽金絲桃素 CAS號： 54328095 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

愈創(chuàng)甘油 CAS號： 93141 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

異鼠李素 3O半乳糖苷 CAS號： 6743926 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢