PCR反應鑒定——PCR反應條件:

【產品名稱】皮諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Nocardia farcinica
【產品編號】YSP7014
【包裝規(guī)格】50T
【預期用途】
產品僅用于科研本產品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實時熒光PCR儀，可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術，針對鴨源性成分核酸序列設計特異性引物和熒光探針，通過實時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細胞cDNA為模板，擴增β-actin基因，與同類產品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強，擴增效率更高。
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PCR實驗方法步驟：
皮諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
產品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
實驗步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合，兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
99%100g100mg()落葉松脂醇110918Kininogen

辛弗林鹽鹽 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 Synephrine HCl

Ursolic acid季基基烯酯共聚物A型標準品規(guī)格：規(guī)格：人DNA(無嘌呤/無嘧啶堿基位點)裂解酶（APEX1）CLIA試劑盒 0.2ml

MYO/MB(Human Myoglobin) ELISA Kit  人肌紅蛋白CAS號：107357 糞卟啉原氧化酶檢測試盒1kgHuman/人Elisa試盒307346

99%500g10mg()丁香樹脂酚1321944Kallikrein 6

 Schenk&Hildebrandt Vitamin MixBR100毫升國產/進口

Arbutin季基基烯酯共聚物B型標準品規(guī)格：規(guī)格：人膜聯(lián)蛋白-A2(Anxa2)CLIA試劑盒 0.2ml

人巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP3α)FKSG14/Centromere protein K  著絲粒蛋白K規(guī)格:96T/48TAmoxapine規(guī)格:3 stripsG補綴FHA域血管生成子1檢測試盒20mg人狀腺癌細胞，TT細胞1x10^6cells

≥99%0.1ml1g脂肪酶(LPS)檢測試劑盒(比濁比色法)Tetanus Toxoid IgG

異丁香酚(正+反)(分析標準品,用于環(huán)境分析) 質量規(guī)格：分析標準品,用于環(huán)境分析 Isoeugenol

AgarBR，強度1200g/c㎡B細胞連接蛋白檢測試盒20mgToll樣受體2檢測試盒Tolllikereceptor4

≥95% (HPLC)500g5g脂肪酶(LPS)檢測試劑盒(比濁微板法)Adenovirus5 antigen

 NLN培養(yǎng)基(含維生素)/NLN Medium with vitaminsBR10升國產/進口

熱休克蛋白90α檢測試盒20mgToll樣受體4檢測試盒αSmoothmuscleactin

99%5g25g脂肪酶(LPS)檢測試劑盒(比濁微板法)Medullary differentiation protein 2

1-萘酚(標準品) 質量規(guī)格：分析標準品 1-Naphthol

AgarBR絨毛膜促性腺激素抗體檢測試盒20mgα平滑肌肌動蛋白檢測試盒β2microglobulin
皮諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒香蜂草苷 CAS號： 14259473 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

香紫蘇內 CAS號： 564205 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

胸五肽 CAS號： 69558550 規(guī)格： HPLC≥98%;50mg 訂購|咨詢

香蘭素 CAS號： 121335 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

消旋山莨菪堿 CAS號： 17659493 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

衛(wèi)矛 CAS號： 608662 規(guī)格： HPLC≥98%; 20mg 訂購|咨詢

烏藥環(huán)二 CAS號： 3984734 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

烏藥環(huán)二 CAS號： 1782792 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

無梗五加苷B CAS號： 7374790 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

烏藥 CAS號： 26146270 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

烏美司 CAS號： 58970766 規(guī)格： HPLC≥98%;100mg 訂購|咨詢

吳茱萸新堿 CAS號： 15266383 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

無水檸檬 CAS號： 77929 規(guī)格： HPLC≥98%;100mg 訂購|咨詢

土克甾 CAS號： 41451870 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

甜菊雙糖苷 CAS號： 41093601 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢