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            檢測(cè)水中大腸埃希氏菌O157:H7的HiMedia顯色培養(yǎng)基

            閱讀:1202      發(fā)布時(shí)間:2019-10-21
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            現(xiàn)在,市面上能見到的顯色培養(yǎng)基大多用于食品和臨床,但HiMedia廠家生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基覆蓋面廣,能用于供水行業(yè)和環(huán)境監(jiān)測(cè)站。下面為您介紹一下。

             

            顯色培養(yǎng)基的評(píng)價(jià)常有多個(gè)指標(biāo),如靈敏度,特異性等,它們也與所檢測(cè)的樣本類型有關(guān)。生產(chǎn)廠家經(jīng)常不提供這些指標(biāo)。但一些第三方檢測(cè)中心或研究機(jī)構(gòu)對(duì)此則有相關(guān)研究,并發(fā)表在專業(yè)期刊上。

             

            2011年,《學(xué)術(shù)研究期刊》發(fā)表了一篇對(duì)顯色培養(yǎng)基的比較研究。作者來自埃及國家研究中心水污染研究部,他們通過用顯色培養(yǎng)基檢測(cè)了水中的大腸埃希氏菌O157:H7,對(duì)顯色培養(yǎng)基進(jìn)行了評(píng)價(jià)(見參考文獻(xiàn)1)。

             

            作者指出,在水中,E. coli O157:H7可以極低水平存在,伴隨大量競爭菌群。傳統(tǒng)方法需要超過48小時(shí)完成培養(yǎng),同時(shí)還需進(jìn)一步的生化鑒定和血清學(xué)鑒定。依據(jù)原理主要是SMAC平板,在麥康凱瓊脂基礎(chǔ)上用山梨醇替代乳糖,E. coli O157:H7不能發(fā)酵山梨醇。該方法存在一定的偏差,因?yàn)橛行〦. coli O157:H7菌株可以發(fā)酵山梨醇。

             

            顯色培養(yǎng)基的出現(xiàn)可改善這一檢測(cè)方法。研究者采用HiMedia公司生產(chǎn)的HiCrome EC O157:H7 Selective agar。因?yàn)榇嬖谔禺愋燥@色底物,E. coli O157:H7菌落呈現(xiàn)深紫色,E. coli菌落則呈現(xiàn)淡粉色至淡紫色。

             

            研究者收集了尼羅河地表水的60個(gè)水樣本。收集水平遵照了200年APHA發(fā)布的指南。所有水樣均收集在無菌的1L玻璃瓶中(Simax品牌,捷克共和國產(chǎn)),并在4℃條件下運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。所有樣品在收集后6小時(shí)內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。

             

            研究用的E. coli O157:H7標(biāo)準(zhǔn)菌株編號(hào)為ATCC 43895。研究者除采用了HiMedia出的HiCrome EC O157:H7 Selective agar(簡稱HEC)外,還采用了美國Biolog 產(chǎn)的Rainbow agar O157(簡稱RB)。該平板為無色,在上面E. coli菌落呈現(xiàn)紅紫藍(lán)黑等不同顏色,E. coli O157:H7呈現(xiàn)深灰色至深黑色。而其他葡萄糖醛酸酶陽性菌株呈現(xiàn)紅色或洋紅色菌落。該培養(yǎng)基添加有新生霉素和亞碲酸鹽。

             

            研究遵循了2005年APHA指南,采用薄膜過濾法對(duì)E. coli O157:H7進(jìn)行了檢測(cè)和計(jì)數(shù)。濾膜放置在培養(yǎng)基上,37℃倒置孵育24小時(shí)。對(duì)典型菌落計(jì)數(shù),單位為CFU/100 ml。菌落的進(jìn)一步確證采用PCR法。終計(jì)算得出靈敏度(真陽性率)、特異性(真陰性率)、總有效率(即(真陽性+真陰性)×100/總數(shù)),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(t檢驗(yàn))。

             

            結(jié)果見表1、表2、表3和表4。

             

            表1. 在不同培養(yǎng)基上,E. coli O157:H7標(biāo)準(zhǔn)菌株的菌落特征

            菌株

            培養(yǎng)基

            陽性菌落

            正確數(shù) (%)

            假陰性菌落

            假陰性數(shù)(%)

            E. coli O157:H7

            HEC

            深紫/紫紅

            30 (93.8)

            淡粉/淡紫

            2(6.2)

            RB

            灰/黑

            30 (93.8)

            不同顏色(如紅紫藍(lán))

            2(6.2)

             

            表2. 非E. coli O157:H7菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落情況

            菌株

            培養(yǎng)基

            真陰性結(jié)果 (%)

            假陽性結(jié)果(%)

            E. coli O157:H7

            HEC

            10 (100)

            0(0.0)

            RB

            9 (90.0)

            1(10.0)

             

            表3. 培養(yǎng)基分離標(biāo)準(zhǔn)菌株的有效性

             

            HEC

            RB

            PCR

            真陽

            30

            30

            30

            真陰

            10

            9

            9

            假陽

            0

            1

            1

            假陰

            2

            2

            1

            靈敏度

            93.7%

            93.7%

            96.7%

            特異度

            100%

            90%

            90%

            有效率

            95.2%

            92.8%

            95.1%

             

            表4. 60個(gè)尼羅河水樣在不同培養(yǎng)基上E. coli O157:H7的假陽性率

             

            分離株數(shù)量

            假陽性數(shù)(%)

            HEC

            80

            5(6.25)

            RB

            80

            8(10.0)

             

            可見,HiCrome EC O157:H7 Selective agar分離E. coli O157:H7具有更高的靈敏度和特異度,并已被PCR進(jìn)一步確證。顯色培養(yǎng)基不失為一種靈敏、快速、特異的方法,并且無須任何確證試驗(yàn)。

             

            HiMedia公司是微生物產(chǎn)品生產(chǎn)商,具有40多年生產(chǎn)研發(fā)經(jīng)驗(yàn),具有WHO-GMP認(rèn)證、ISO9001,ISO13485質(zhì)量體系認(rèn)證和CE、FDA注冊(cè)登記。產(chǎn)品已行銷世界上140多個(gè)國家。

             

            締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測(cè)領(lǐng)域,一如既往地為您帶來的服務(wù)。

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