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            支原體污染引發(fā)細胞應激狀態(tài)的一則報道

            閱讀:714      發(fā)布時間:2020-12-31
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            支原體是一種大小在細菌和病毒之間、可自我復制的原核細胞。它具有如下特點:

            • 支原體無細胞壁,有簡單的質(zhì)膜。
            • 具有高度多形性,多呈不規(guī)則球狀、長絲狀,可分枝??纱┻^0.45µm孔徑的濾膜。
            • 支原體寄生于人、動物、植物、昆蟲細胞,為寄生生活。
            • 支原體容易附著于細胞表面,與宿主細胞胞膜融合并交換成分。

            支原體無論是對于科研或臨床用的培養(yǎng)細胞,還是對于工業(yè)上的生產(chǎn)細胞,都會產(chǎn)生嚴重的危害,例如導致細胞基因表達譜改變,但更多具體的改變并不清楚。

            2020年《Scientific Report》期刊上發(fā)表一篇國外的研究,報道支原體感染乳腺上皮細胞會引發(fā)炎性基因上調(diào),導致細胞進入應激狀態(tài)。

            標示著細胞進入應激狀態(tài)的標志是Lcn2基因表達升高。Lcn2基因常表達在參與先天免疫反應的細胞中,這其中即包括上皮細胞。Lcn2基因的產(chǎn)物,在人即是NGAL蛋白,它是有名的腎損傷血清標志物。NGAL可由各種組織的上皮細胞產(chǎn)生,這些組織包括腎、乳腺、子宮、肝臟、胃、小腸、結(jié)腸、肺臟等。以往在一些組織上觀察到,在病原菌入侵或出現(xiàn)應激時,它的表達就會升高。

            在《Scientific Report》上發(fā)表的這項研究中,作者采用了乳腺上皮細胞系HC11作為培養(yǎng)細胞,發(fā)現(xiàn)不僅支原體污染能引發(fā)細胞內(nèi)的Lcn2基因表達升高,而且僅僅是向培養(yǎng)液中加入支原體膜上的一種成分——MALP-2脂肽,也能使細胞出現(xiàn)Lcn2的表達升高。

            作者發(fā)現(xiàn),在Lcn2升高之前,被支原體感染的細胞還出現(xiàn)了TNFα、IL-6和IκBζ表達增加。已知TNFα、IL-6是促炎性因子,而IκBζ是炎性信號通路上的關(guān)鍵分子。

            作者還揭示了Lcn2基因活化的機制,是需要轉(zhuǎn)錄因子NFκB和C/EBP的參與。

            該研究的部分數(shù)據(jù)如下:

             

            圖1. 支原體PCR檢測顯示,被支原體污染的乳腺上皮細胞系HC11存在支原體陽性條帶(280bp),證明有支原體污染。加入支原體祛除劑后,支原體條帶消失,證明支原體污染已祛除。

            Infected:被支原體感染的細胞;

            Cured:加入了支原體祛除劑治療的細胞;

            reinfected:被支原體再次感染的細胞。

            圖片來自該論文。

             

            圖2. 與支原體治愈組和支原體未感染組比較,支原體污染組細胞Lcn2、IL-6和TNFα表達顯著升高。

            Infected:被支原體感染的細胞;

            Cured:加入了支原體祛除劑治療的細胞;

            reinfected:被支原體再次感染的細胞;

            Uninfected:未被支原體感染的細胞。

            圖片來自該論文。

            該研究很好地詮釋了支原體污染細胞后,會使細胞進入應激狀態(tài),使炎性基因上調(diào),從而影響整個細胞基因表達譜的改變。盡管是該研究是以乳腺上皮細胞為模型,但對其他上皮細胞乃至其他類型細胞,都具有借鑒意義。因此應在平時的實驗和生產(chǎn)中,注意支原體的預防和監(jiān)測,防止對實驗和生產(chǎn)造成不良影響。

            參考文獻:

            Zhao, W., Bendickson, L. & Nilsen-Hamilton, M. The Lipocalin2 Gene is Regulated in Mammary Epithelial Cells by NFκB and C/EBP In Response to Mycoplasma. Sci Rep10, 7641 (2020).

            在支原體PCR檢測方面,

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            高特異性,僅一條陽性對照條帶,即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。操作簡單,易于觀察。

            高靈敏度,若PCR反應體系加入10μl樣本,支原體檢測限度為≤5或≤10CFU/ml。

            ④該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體,與細菌和真核DNA無交叉反應。

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