細(xì)胞培養(yǎng)是生物醫(yī)學(xué)研究的常見(jiàn)操作，其中避免細(xì)菌污染是重要一環(huán)。對(duì)于生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室，早期就檢查培養(yǎng)細(xì)胞中是否存在細(xì)菌污染，對(duì)于解決細(xì)胞污染問(wèn)題，是一個(gè)合理的選擇。
據(jù)估計(jì)，高達(dá)5%的細(xì)胞培養(yǎng)物發(fā)生過(guò)細(xì)菌污染，并且缺乏肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌污染跡象，如渾濁、培養(yǎng)基突然變色(酚紅)或出現(xiàn)微生物顆粒。此外，細(xì)菌可對(duì)標(biāo)準(zhǔn)抗生素(如青霉素/鏈霉素)表現(xiàn)出耐藥性，并直接影響細(xì)胞代謝、生長(zhǎng)和分化。因此，采用一款快速、靈敏、可靠的細(xì)菌檢測(cè)試劑盒，就顯得尤為必要。
德國(guó)MB公司專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的細(xì)菌PCR檢測(cè)Kit可以直接檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)衍生的生物制劑和細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)菌污染。下面小編介紹一下。
一、產(chǎn)品信息
二、產(chǎn)品描述
該試劑盒采用PCR方法，用于檢測(cè)生物樣品（包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液）中是否存在細(xì)菌。
該試劑盒針對(duì)細(xì)菌16S rRNA基因高度保守區(qū)。根據(jù)序列一致性，可至少檢測(cè)污染細(xì)胞常見(jiàn)的45種細(xì)菌屬，具體如下：
放線菌Actinomyces
芽孢桿菌Bacillus
腸球菌Enterococcus
埃希氏桿菌Escherichia
梭菌Fusobacterium
克雷伯氏菌Klebsiella
乳酸桿菌Lactobacillus
微球菌Micrococcus
分枝桿菌Mycobacterium
假單胞菌Pseudomonas
卟啉單胞菌Porphyromonas
普氏菌Prevotella
沙門(mén)氏菌Salmonella
沙雷氏菌Serratia
軍團(tuán)菌Legionella
葡萄球菌Staphylococcus
鏈球菌Streptococcus
消化鏈球菌Peptostreptococcus
該試劑盒靈敏度達(dá)到100個(gè)基因組拷貝/PCR反應(yīng)。
說(shuō)明：該試劑盒只用于科研，不用于工業(yè)QC。
三、試劑盒包括：
凍干型PCR mix：含引物/核苷酸/內(nèi)控對(duì)照DNA /熱啟動(dòng)聚合酶；
復(fù)溶緩沖液；
凍干型陽(yáng)性對(duì)照DNA；
PCR級(jí)水。
四、樣本處理
樣本不用提DNA，只需熱滅活（95 °C 5分鐘）；
樣本需不含抗生素，如含抗生素，則細(xì)胞應(yīng)在不含抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至少一代后再檢測(cè)。
五、反應(yīng)體系
25μl反應(yīng)體系：含20 μl PCR Mix和5μl模板。
六、結(jié)果判定
PCR結(jié)束后在瓊脂糖電泳上跑膠。典型結(jié)果如下圖所示。
圖. 電泳分析結(jié)果。左側(cè)為內(nèi)控對(duì)照條帶，在140bp，用于排除假陰性。如有內(nèi)控條帶，則顯示PCR反應(yīng)正常，樣本中無(wú)PCR抑制成分。右側(cè)為目的條帶，在467bp左右。如有目的條帶，則提示有細(xì)菌污染。
七、產(chǎn)品引用文獻(xiàn)
Simonsen Ø. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.
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