在細(xì)胞更新過程中，表觀遺傳信息需要精確地恢復(fù)，以維持DNA復(fù)制后的細(xì)胞身份和基因組完整性。組蛋白標(biāo)記H3K27me3對(duì)胚胎干細(xì)胞兼性異染色質(zhì)的形成和發(fā)育基因的抑制至關(guān)重要。
然而，H3K27me3是如何在DNA復(fù)制后精確地恢復(fù)的，仍然知之甚少。近日，科研人員使用ChOR-seq(復(fù)制后染色質(zhì)占用)來監(jiān)測(cè)DNA復(fù)制過程中H3K27me3在新生DNA上的動(dòng)態(tài)重建。研究人員發(fā)現(xiàn)H3K27me3的恢復(fù)速率與致密染色質(zhì)狀態(tài)高度相關(guān)。
此外，科研人員還發(fā)現(xiàn)連接蛋白H1促進(jìn)H3K27me3在抑制基因上的復(fù)制后快速恢復(fù)，并且在H1部分耗盡后，H3K27me3在新生DNA上的恢復(fù)速率大大降低。
最后，體外生化實(shí)驗(yàn)表明，H1通過壓實(shí)染色質(zhì)促進(jìn)PRC2對(duì)H3K27me3的增殖。
總之，研究結(jié)果表明，h1介導(dǎo)的染色質(zhì)壓實(shí)有助于DNA復(fù)制后H3K27me3的繁殖和恢復(fù)。
相關(guān)研究：
“Histone H1 facilitates restoration of H3K27me3 during DNA replication by chromatin compaction"
該項(xiàng)研究中，為了構(gòu)建含有mESCs的8×TetO，研究人員直接將8×tetO陣列與驅(qū)動(dòng)EGFP基因表達(dá)的人類CYP26A1啟動(dòng)子融合。
CRISPR/Cas9的引導(dǎo)序列為:5’-TCTGAACTGGCTGTTTAGTC-3’。為了研究組蛋白h1介導(dǎo)的染色質(zhì)壓縮在促進(jìn)H3K27me3增殖中的作用，研究人員分別在野生型或H1c/d/e-TKO靶向mESCs中過表達(dá)HA-EZH2-TetR和FLAG-EED或HA-EED-TetR和FLAG-EZH2。
所有mESCs在明膠包被的組織培養(yǎng)板上生長(zhǎng)，mLIF濃度為1000 U/ml ，培養(yǎng)基中添加15% FBS (Ausbian，澳洲)、100 mM非必需氨基酸、0.1 mM β-巰基乙醇、2 mM l -谷氨酰胺、核苷和抗生素。
該項(xiàng)研究所用到的血清是Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清。
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