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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，如果發(fā)生支原體污染，很容易影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和行為，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)異常。長(zhǎng)期存在的支原體污染可能對(duì)細(xì)胞系的健康產(chǎn)生負(fù)面影響，甚至可能改變細(xì)胞系的基因表達(dá)和生物學(xué)特性。

因此，細(xì)胞學(xué)相關(guān)的基礎(chǔ)研究中，需要做好嚴(yán)格地衛(wèi)生清潔工作，預(yù)防支原體污染，并使用方便快捷的方法，監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室及實(shí)驗(yàn)品中是否存在支原體污染。

如果需要定期檢測(cè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中的培養(yǎng)物，是否存在支原體污染，推薦使用德國(guó)Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor® Gem Classic支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒。

通過(guò)擴(kuò)增16S rRNA編碼區(qū)來(lái)特異性檢測(cè)支原體，而真核生物和其他細(xì)菌DNA(除“檢測(cè)特征"部分報(bào)道的DNA外)在Venor®GeM Classic檢測(cè)中不擴(kuò)增。

根據(jù)支原體種類的不同，擴(kuò)增子的大小在265-278 bp之間。

Venor®GeM Classic常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒經(jīng)典法特點(diǎn)：

1.內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，僅一條陽(yáng)性對(duì)照條帶，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀察。

3.高靈敏度，若PCR反應(yīng)體系加入10μl樣本，支原體檢測(cè)限度為≤5或≤10CFU。

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測(cè)出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體，與細(xì)胞和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

5.試劑盒中不含Taq酶，可另外購(gòu)買。推薦使用德國(guó)MB公司的Taq酶。

通過(guò)生物技術(shù)生產(chǎn)的藥物、疫苗和其他治療性產(chǎn)品，其制備過(guò)程涉及細(xì)胞培養(yǎng)、發(fā)酵和其他復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程。如果該過(guò)程存在支原體污染，則可能會(huì)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響，甚至可能引發(fā)潛在的安全隱患。

各國(guó)對(duì)于生物醫(yī)藥制品的生產(chǎn)過(guò)程中，支原體的檢測(cè)有著嚴(yán)格的要求?！端幍洹分幸?guī)定“培養(yǎng)法"和“指示細(xì)胞法"是傳統(tǒng)方法，如果用核酸法替代傳統(tǒng)方法，需要經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證。

因此，在選擇臨床項(xiàng)目申報(bào)所用的支原體檢測(cè)試劑盒時(shí)，需選擇通過(guò)《藥典》方法學(xué)驗(yàn)證的試劑盒。需要兼顧靈敏度和特異性。

在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對(duì)支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，簡(jiǎn)稱qPCR。

qPCR實(shí)驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：

①靈敏度高、特異性強(qiáng)。

②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結(jié)果

③檢測(cè)結(jié)果可定量

④操作簡(jiǎn)便

綜上，支原體qPCR檢測(cè)試劑盒比較合適的選擇。

德國(guó)MB支原體qPCR檢測(cè)試劑盒：

Venor®Gem qEP

產(chǎn)品特點(diǎn)：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀察。

③高靈敏度，MB公司的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒經(jīng)典法檢測(cè)限可達(dá)到≤10CFU/ml。

④MB公司有相應(yīng)配套的10CFU/100CFU的敏感度測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)品，便于方法學(xué)驗(yàn)證。

⑤MB公司有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗(yàn)證。

⑥MB公司有相應(yīng)配套的支原體絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測(cè)。

⑦內(nèi)控對(duì)照為獨(dú)立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。