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            預(yù)制膠常見問題指南
            
        			
            閱讀：6788      發(fā)布時間：2018-3-15
        				
            
							
				
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              注意事項
               ★一定要使用我們盒內(nèi)配套的電泳緩沖液；                                          ★上樣量和濃度不能過高。
            1.我們的預(yù)制膠與哪些品牌電泳槽兼容？
                        
                                    
              ● Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)；
                          ● Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)；
                          ● Life Technology (Invitrogen)；
                          ● Novex Mini-Cell；
                                    		                        
              ● Mini Gel Tank (A25977) (請與EZbiolab 特制擋板配合使用)；
                          ● 北京六一 DYCZ-25E；
                          ● 君意東方 JY-SCZ2+；
                          ● 天能 VE180。
                                    		        
                
            2.Running buffer粉末如何溶解？
               電泳前，將running buffer 粉末用ddH2O溶解至500ml即可。
            3.變性膠和非變性膠的區(qū)別？
               變性膠與非變性的凝膠成分是一樣的，均不含SDS。兩者的*區(qū)別在于變性膠的running buffer中含SDS, 而非變性膠的running buffer不含SDS。
            4.不同緩沖體系，蛋白遷移率不同？
               Q1：為什么蛋白表達出來了，SDS-PAGE檢測時大小不符？
               A1：進行SDS-PAGE檢測的時候蛋白的凈電荷會影響遷移率。帶電量高的蛋白會結(jié)合較少的SDS，因此阻礙了蛋白泳動。富含脯氨酸的蛋白會在SDS-PAGE膠中移動得特別慢。但是如果蛋白的等電點在5-9之間，并且組成的氨基酸組分沒有明顯的偏好，那么目的蛋白遷移率與預(yù)期相差較遠就很有可能不是由于凝膠電泳造成的。這個時候利用C-端或者N-端的標簽進行Western Blot，看是否由于蛋白被蛋白酶降解而導(dǎo)致多條目的條帶或者比預(yù)期小很多的條帶出現(xiàn)。如果蛋白酶過高可以嘗試換個缺陷菌株。
            5.剝膠困難怎么辦?
               *步: 用小刀劃開側(cè)邊的膠即可打開玻璃板
               第二步：順著紅色的線用小刀輕輕劃一下 
             
            6.預(yù)染marker沒有跑出來條帶？
               原因很可能是客戶沒有用我們的Hepes running buffer 來跑膠，而是用了如 tris-glycine等其他running buffer。
               我們做過對比實驗，結(jié)果如下圖所示：
            7.1.5mm的預(yù)制膠，您推薦的染色時間是幾分鐘合適？
               微波爐加熱至少90℃，置于搖床上染色30min。
            8.條帶跑斜或跑成點狀的原因是什么？
               條帶跑斜和蛋白的濃度有關(guān)，不同的蛋白遷移速度， 不會有什么影響， zui終跑膠結(jié)果的條帶還是平的。 
               跑成點狀的原因是：
               1、蛋白樣品的總濃度過高，適當降低濃度。             2、樣品沒有處理充分             3、 沒有吹打上樣孔， 樣品沒有沉到膠孔底部。
            9.尿素膠與TBE膠分離范圍是哪些呢？
                        
                            尿素核酸預(yù)制膠分離范圍：                TBE核酸預(yù)制膠分離范圍：        
                    
                            5%    50–1000 nt
                            10%    35–300 nt
                            15%     10–50 nt            		                5%    200 bp–2 kb
                            10%   50 bp–1.5 kb
                            15%   20 bp–1 kb            		        
                
            尿素膠跑的是單鏈的核酸分子，所以單位是一個核苷酸 Nucleotide，簡稱nt。TBE膠跑的是雙鏈核酸分子，所以單位是堿基對base pair，簡稱bp。
            愛必信特色產(chǎn)品線：
            生化試劑（60萬種）、抗體（10萬種）、細胞因子、二抗、ECL發(fā)光液、蛋白marker、激動劑、抑制劑、凋亡試劑盒、BSA、動植物提取物、蛋白酶K、組化筆...
            
        		
            
        		
			
            
        
            
    
            
	 		 
	
            
		
            
			
            
				
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