組化作為基礎的免疫學實驗，每個小步驟中卻包含著決定成敗的技巧，這些你都知道嗎，就讓小編總結(jié)下給到你吧。
1.固定： 很好用4%的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好;但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。 有時候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液，請于購置前注意說明書。
Bouin S固定液：飽和picric acid750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對組織的穿透力較強，固定較好，結(jié)構(gòu)完整，但因偏酸，對抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標本的長期保存。
PLP液：即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存較好。
2.組織脫水，透明：時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整。
3.切片時展片：有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當?shù)卦谒屑尤霂椎我掖肌?/p>
4.烤片：60℃ 30分鐘或37℃ 過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。
5.蠟塊及切片的保存：在4℃保存較好
6.脫片問題：Poly-L-Lysine(多聚賴氨酸)為目前免疫組化 染色工作中常用的一種防脫片劑，6ml的多聚賴氨酸溶液可按1:10稀釋成60ml的工作液，適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如不行，可用雙重處理(APES和Poly-L-Lysine)的切片。在以上兩種條件都行不通的情況下，可用如下方法：切片在脫蠟前，放在APES 1：50 丙酮溶液中浸泡3分鐘，晾干，即可進行下一步。
7.滅活內(nèi)源性酶：HRP系統(tǒng)：3%雙氧水滅活;AP系統(tǒng)：3%HAc滅活。
8.暴露抗原：對于石蠟切片的免疫組化實驗 時，必須采用高溫加熱抗原修復，這將有助于暴露抗原決定簇，從而增加免疫組化染色的強度(不同抗體的比較好的佳修復液請參閱抗體說明書)。對于不同的組織，不同的抗原，不同的抗體，所采用的方法應不一樣，可進行熱修復、胰酶消化、既不修復也不消化。膠原還可以用胃蛋白酶消化等。
9.封閉：在山羊血清封閉，非特異性染色仍然較強時，可延長封閉時間或用濃縮血清封閉
10.抗體稀釋：應遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”的原則，對于PBS稀釋的抗體一定要當天使用。
11.背景高：在抗體濃度、反應時間、反應溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含1‰ Tween20的PBS洗，特別是在顯色之前要多洗。
12.返藍：在蘇木素復染后，可用堿性緩沖液(如PBS)或Na2HPO4的飽和溶液返藍。
13.顯色：一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。
14.在整個操作過程中，切片千萬不能干燥，否則會有非特異性染色。
以上就是免疫組化各個步驟中包含的需要注意的細節(jié)，看完是不是對你有所啟發(fā)呢，愛必信5月*正在火熱進行中，涵蓋多條產(chǎn)品線的比較常用試劑，2件8折，5件75折，更有可愛的玩偶相贈，也包含IHC基礎產(chǎn)品線產(chǎn)品，快來看看吧！
培養(yǎng)線:
| 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 目錄價 |
| abs974 | 胎牛血清(標準級) | 125/500mL | 683/2541 |
| abs975 | 胎牛血清(標準級)，輻照 | 125/500mL | 746/2751 |
| abs972 | 胎牛血清(優(yōu)級) | 125/500mL | 935/3465 |
| abs973 | 胎牛血清(優(yōu)級)，輻照 | 125/500mL | 998/3675 |
| abs9412 | Serum-Free干細胞凍存液 | 100mL | 1943 |
| abs9413 | Serum-Free細胞凍存液 | 50mL/100mL | 903/1712 |
| abs80002 | 雞胚提取物 | 10ml | 2500 |
| abs9119 | Bovine Pituitary Extract (BPE) | 10mg/25mg | 1820/2700 |
常規(guī)常用:
| 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 目錄價 |
| abs9187 | 二甲基亞砜(DMSO)(細胞培養(yǎng)級) | 50ml | 189 |
| abs955 | 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒 | 50tests | 2625 |
| abs957 | 即用型高效免疫組化二抗試劑盒 | 5ml | 2000 |
| abs930 | ficoll | 50ml/100ml | 262/420 |
| abs9156 | 牛血清白蛋白（BSA，cell culture） | 50g/100g | 735/1155 |
| abs9157 | 牛血清白蛋白 （BSA） | 100g | 525 |
| abs9169 | Insulin, from Bovine Pancreas | 25/100/500mg/1g | 231/683/2604/4515 |
| abs42019847 | Insulin(重組人胰島素) | 100mg/1g | 1400/9600 |
| abs50002 | 中性粒細胞呼吸爆發(fā)檢測試劑盒 | 25T/50T/100T | 2000/3200/5000 |
| abs80001 | 霍亂毒素B亞單位 | 1mg | 2200 |
| abs9118 | Proteinase K | 100mg/1g | 188/1600 |
| abs9122 | Surfactin | 10mg | 3950 |
| abs47014828 | Hygromycin B | 1g/5g/10g | 750/3840/6144 |
| abs50001 | Annexin V-FITC 凋亡檢測試劑盒 | 50T/100T | 1050/1838 |
| abs920 | ECL化學發(fā)光檢測試劑盒 | 2*250ml | 1155 |
| abs922/923/924 | 預染蛋白marker | 500ul/5*500ul | 詢價 |
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Absin特色產(chǎn)品線： WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預染marker、預制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體；定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
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