在樣本制備的過(guò)程中，往往會(huì)應(yīng)用一些試劑（如多聚甲醛、福爾馬林等）對(duì)新鮮組織進(jìn)行處理，這個(gè)過(guò)程可能導(dǎo)致抗原位點(diǎn)被封閉，為了避免影響后續(xù)免疫染色的效果，我們需要先對(duì)切片進(jìn)行抗原修復(fù)。對(duì)于石蠟切片來(lái)說(shuō)，抗原修復(fù)是必須的步驟，常用的方法有酶消化法和熱修復(fù)法。
1、酶消化法
作為最早的抗原修復(fù)方法，常用的消化酶有三：胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用極易受溫度影響，如果消化不足，則無(wú)法充分暴露出抗原位點(diǎn)，過(guò)度的消化又會(huì)破壞組織結(jié)構(gòu)，影響最后陽(yáng)性信號(hào)的判讀，因此在后續(xù)的發(fā)展中，酶消化法漸漸被熱修復(fù)技術(shù)所替代，但對(duì)于個(gè)別抗原，如免疫球蛋白、補(bǔ)體，以及在甲醛固定、石蠟包埋的腎活檢中，酶消化法依舊不可替代。
2、熱修復(fù)法
抗原熱修復(fù)是采用高溫、高壓方法配合合適的抗原修復(fù)液，使得被固定液封閉的抗原位點(diǎn)重新暴露，提高抗體的陽(yáng)性檢出率。
常用的抗原修復(fù)液有兩種：檸檬酸鈉緩沖液（pH=6）、EDTA緩沖液（pH=8或9），一般來(lái)說(shuō)一抗的說(shuō)明書(shū)都會(huì)寫(xiě)明需要選擇哪種修復(fù)液。如果說(shuō)明書(shū)沒(méi)有推薦，檸檬酸鈉緩沖液能夠適配大部分的抗體，EDTA緩沖液相對(duì)修復(fù)效果更強(qiáng)，但陽(yáng)性增強(qiáng)的同時(shí)也會(huì)提高非特異背景，一些比較難表達(dá)的抗體可以選擇EDTA緩沖液。
熱修復(fù)方法 | 微波熱修復(fù) | 水浴熱修復(fù) | 高壓熱修復(fù) |
操作 | 在染色盒中加入抗原修復(fù)液，放入切片，置于微波爐中高火煮沸，低火維持15min后取出染色盒，冷卻至室溫 | 在染色盒中加入抗原修復(fù)液，放入切片，置于水溶鍋中加熱，其間不斷用溫度計(jì)測(cè)其溫度，待抗原修復(fù)液的溫度達(dá)到有效溫度（92℃↑），維持40min后取出染色盒，冷卻至室溫 | 在染色盒中加入抗原修復(fù)液，放入切片，置于高壓鍋內(nèi)加熱至飽壓后繼續(xù)加熱5min，關(guān)閉電源，10min后取出染色盒，冷卻至室溫 |
優(yōu)點(diǎn) | 加熱的時(shí)間和溫度都可以有所調(diào)整 | 溫和，均勻，不易脫片，對(duì)組織形態(tài)結(jié)構(gòu)影響少 | 受熱均勻，暴露抗原位點(diǎn)效果好，受環(huán)境條件影響小，可重復(fù)性高 |
缺點(diǎn) | 時(shí)間長(zhǎng)，修復(fù)液容易蒸干，需要及時(shí)觀察補(bǔ)充；受熱容易不均勻，沸騰易導(dǎo)致脫片；不同微波爐功率有差異，難以標(biāo)準(zhǔn)化 | 需要較長(zhǎng)時(shí)間；染色盒材料不同，熱傳導(dǎo)性不同，會(huì)影響加熱效果，容易出現(xiàn)抗原表達(dá)弱、陽(yáng)性率低的結(jié)果 | 易導(dǎo)致脫片；使用高壓鍋要小心蒸汽燙傷，使用要規(guī)范謹(jǐn)防鍋內(nèi)蒸汽過(guò)飽和引發(fā)事故 |
小愛(ài)溫馨提示，沒(méi)有哪一種抗原修復(fù)液或者修復(fù)方法能夠適配所有的抗體和樣本，最佳條件還是需要在摸索實(shí)踐中確定哦！
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分類 | 貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 貨期 |
固定 | abs9179 | 4%多聚甲醛/通用型組織固定液 | 500ml | 現(xiàn)貨 |
抗原修復(fù) | abs9249 | 檸檬酸鈉-EDTA抗原修復(fù)液(40×) | 100ml | 現(xiàn)貨 |
abs9207 | 冰凍切片快速抗原修復(fù)液(5×) | 100ml | 現(xiàn)貨 | |
abs9208 | 細(xì)胞爬片抗原修復(fù)液（1X） | 100ml | 現(xiàn)貨 | |
abs9247 | EDTA抗原修復(fù)液(50×) | 100ml | 現(xiàn)貨 | |
abs9342 | Tris-EDTA抗原修復(fù)液(10×,pH9.0) | 100ml | 現(xiàn)貨 | |
abs9248 | 檸檬酸鈉抗原修復(fù)液(50×) | 100ml | 現(xiàn)貨 | |
abs9336 | 胃蛋白酶抗原修復(fù)液 | 100ml | 現(xiàn)貨 | |
細(xì)胞通透（胞內(nèi)指標(biāo)） | abs9149 | Triton X-100/曲拉通X-100 | 100ml/500ml | 現(xiàn)貨 |
淬滅 | abs9333 | 過(guò)氧化物酶封閉液(H2O2法) | 100ml | 現(xiàn)貨 |
abs9152 | 吐溫-20 | 500ml/2.5L | 現(xiàn)貨 | |
封閉 | abs933 | Goat serum | 10ml/50ml | 現(xiàn)貨 |
abs935 | 驢血清 | 50ml | 現(xiàn)貨 | |
abs9157 | 牛血清白蛋白 (BSA) | 100g | 現(xiàn)貨 | |
一抗 | 多指標(biāo)IHC專用一抗（CD3、CD8、CD4、FOXP3、KI-67......） | 1-2周 | ||
abs9299 | 一抗二抗稀釋液 | 100ml/1L | 現(xiàn)貨 | |
二抗 | 即用型二抗試劑盒（abs957、abs996、abs997、abs998） | 現(xiàn)貨 | ||
HRP二抗 | 現(xiàn)貨 | |||
顯色液 | abs9210 | DAB 顯色試劑盒（棕黃色，IHC） | 1kit | 現(xiàn)貨 |
abs9211 | DAB 顯色試劑盒（藍(lán)紫色，IHC） | 1kit | 現(xiàn)貨 | |
復(fù)染（可選） | abs9214 | 改良型Mayer's蘇木素染液 | 100ml/500ml | 現(xiàn)貨 |
封片（DAB顯色） | abs9177 | 中性樹(shù)膠 | 100ml | 現(xiàn)貨 |
緩沖液 | abs962 | 1×PBS緩沖液 | 500ml/500ml*10 | 現(xiàn)貨 |
abs952 | 10*TBST | 100ml/1L | 現(xiàn)貨 | |
abs9340 | PBST(1×,pH7.4) | 500ml | 現(xiàn)貨 | |
組化筆 | abs929 | PAP Pen 組化筆 | 1支 | 現(xiàn)貨 |
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