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            細(xì)胞培養(yǎng)小分子藥物配制方法解析

            閱讀:1847      發(fā)布時間:2023-3-27
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            科研實驗中我們經(jīng)常需要配制各種濃度的試劑。例如細(xì)胞實驗一般需要加入小分子激動劑/抑制劑;分子轉(zhuǎn)化實驗一般會加入抗生素;免疫實驗需要加入免疫刺激物/免疫佐劑等。這些昂貴的試劑濃度一旦計算錯誤,不僅挑燈夜戰(zhàn)得來的數(shù)據(jù)毀于一旦,早日發(fā)文的愿望也隨之破滅,可謂一失足成千古恨。今天小愛就為大家解決這一難題,讓我們學(xué)會快速換算試劑濃度,擺脫科研失誤。


            案例一

            抑制劑儲存液配制



            我們買來的小分子抑制劑一般是凍干粉,需要把它配制成溶液。首先,我們應(yīng)該知道藥物的分子量、溶解度以及規(guī)格。如果是毫克級小包裝,一般不需要稱量分裝,直接在原瓶中溶解配成儲存液。

            以ROCK抑制劑Y-27632為例,產(chǎn)品信息如下:

            CAS號

            規(guī)格

            分子量

             可溶性/溶解性

            146986-50-7

            5mg

            247.34

            DMSO:≥ 32mg/mL (129.38mM)


            該藥物推薦溶劑DMSO,同時,最大只能配成129.38mM的儲存液。這一點非常重要。有些人沒有注意藥物溶解性,直接在非水溶性藥物中加入PBS配置,結(jié)果藥物不溶,“損失慘重"。


            假如我們需要配置10mM儲存液,計算公式如下:

              質(zhì)量(mg)= 濃度(mM)x 體積(L)x 分子量  (1)
            5(mg)= 10(mM)x ?(L)x 247.34


            即向含5mg Y-27632的原瓶中加入2.02mL DMSO,即可配制成10mM溶液。(注:此處要預(yù)估原瓶的容量,如果原瓶容量小于2 mL,應(yīng)考慮配置更大濃度的儲存液,如20mM,加入1.01 mL DMSO)。

            此外,我們也會經(jīng)常遇到質(zhì)量濃度和摩爾濃度單位轉(zhuǎn)換,同樣以10mM Y-27632為例:

            10mM=10mmol/L,化合物分子量為247.34,即247.34g/mol=247.34mg/mmol

            10mmol/L x 247.34mg/mmol = 2473.4mg/L= 2.4734mg/mL

            即10mM Y-27632溶液相當(dāng)于2.4734mg/mL

            濃度快速換算法則

            1)mM轉(zhuǎn)換mg/mL,摩爾濃度數(shù)值乘以分子量再除以1000;


            2)mg/mL轉(zhuǎn)換mM,質(zhì)量濃度數(shù)值除以分子量再乘以1000。


            案例二

            抑制劑儲存液稀釋


            我們買來抑制劑的凍干粉,配制儲存液的濃度為10mM,如果需要使用終濃度為25uM進行細(xì)胞實驗,需要加入多少抑制劑儲存液呢?記住下面這個稀釋公式就可以了:

            起始濃度 x 起始體積 = 最終濃度 x 最終體積

              C1(mM) x V1(mL)= C2(mM)x V2(mL) (2)

            首先,

            注意單位,我們假設(shè)最終體積為2mL,代入公式:

            10(mM)x V1(mL)= 0.025(mM)x 2(mL)




            即我們需要吸取5uL的儲存液進行實驗操作。


            案例三

            百分比濃度換算



            我們在使用二硫蘇糖醇(DTT)做實驗時,會遇到這樣的問題:已發(fā)表的文獻中使用0.1%的DTT溶液,而你購買的DTT為1mol/L的儲存液,那么這該如何換算呢?請聽小愛為您解答:

            DTT的分子量為154,即154g/mol,儲存液換算成質(zhì)量濃度C1為

            154g/mol x 1mol/L = 154g/L




            假設(shè)需配制1L的0.1%DTT溶液,即V2 = 1L = 1000mL

            0.1% DTT溶液為0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L,即C2 = 1g/L

            再使用公式(2)C1 x V1 = C2 x V2 可得:

            154(g/L)x V1(L)= 1(g/L)x 1(L)



            V1 = 6.5mL,即吸取6.5mL 1mol/L的DTT儲存液,加入993.5mL稀釋液中即可獲得0.1%的DTT溶液。

            如果我們購買的是固體二硫蘇糖醇,配制0.1%的DTT溶液方法如下:精確稱取1g二硫蘇糖醇,用水定容至1000mL即可。


            DL-二硫蘇糖醇科普

            DL-二硫蘇糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)具有很強的還原性,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構(gòu)象穩(wěn)定性。DTT有抗氧化作用,它能保護酶分子上的還原性基團,維持還原性環(huán)境,穩(wěn)定酶的活性。DTT中還含有一定RNA酶抑制劑,具有抑制RNA酶活性的作用。具有巰基乙醇相似的作用,但DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。用作蛋白質(zhì)巰基保護劑和蛋白質(zhì)二硫鍵的裂解和順序分析。

            DL-二硫蘇糖醇應(yīng)用:

            ※ 作為牛奶中主要過敏原αs1-酪蛋白的還原和烷基化反應(yīng)物之一;

            ※ 作為精子去膜和再激活培養(yǎng)基的一個組分;

            ※ 因硫醇可有效保護生物催化劑的活性位點而維持酶的穩(wěn)定性;

            ※ 作為還原劑用于測試N-乙基馬來酰亞胺與巰基反應(yīng)的特異性。


            產(chǎn)品信息:

            貨號

            產(chǎn)品名稱

            規(guī)格

            貨期

            abs9226

            DTT溶液(1mol/L)

            5mL

            現(xiàn)貨

            abs47002083

            DL-二硫蘇糖醇(>98%,BR級)

            5g/25g

            現(xiàn)貨

            abs42017588

            DL-二硫蘇糖醇(>97%)

            1g/5g

            現(xiàn)貨


            小分子抑制劑產(chǎn)品推薦:

            貨號

            產(chǎn)品名稱

            規(guī)格

            貨期

            abs810012

            Brefeldin A

            10mg/25mg

            現(xiàn)貨

            abs812852

            PMSF

            50mg/100mg/200mg

            現(xiàn)貨

            abs810003

            U0126

            5mg/10mg/25mg/50mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs810466

            Cisplatin

            5mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810001

            LY 294002

            10mg/25mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs812864

            Y-27632

            5mg/10mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs812972

            Poly(I:C)

            10mg/50mg

            1-2周

            abs810008

            SP600125

            10mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810744

            Erastin

            5mg/10mg/50mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs817419

            Suramin Sodium Salt

            25mg

            現(xiàn)貨

            abs817348

            IBMX

            25mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs810006

            Staurosporine

            5mg/25mg

            現(xiàn)貨

            abs812846

            Geneticin (G418 Sulfate)

            250mg/500mg

            現(xiàn)貨

            abs810030

            Rapamycin

            5mg/10mg/100mg/1g

            現(xiàn)貨

            abs810575

            3-Methyladenine

            25mg/50mg/200mg/500mg

            現(xiàn)貨

            abs819421

            Prostaglandin E2

            5mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs817025

            Capsaicin

            25mg/50mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs810009

            SB202190(FHPI)

            5mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810016

            Cyclosporin A

            5mg/25mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810010

            PD 98059

            5mg/10mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs819747

            Nigericin sodium salt

            5mg/10mg/25mg

            現(xiàn)貨

            abs812975

            Monensin sodium salt

            25mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs810716

            Doxorubicin hydrochloride

            5mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810020

            Paclitaxel

            5mg/10mg/25mg/50mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs810481

            SB-431542

            5mg/10mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810640

            Y-27632 2HCl

            5mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs812033

            Leupeptin Hemisulfate

            5mg/10mg/25mg

            現(xiàn)貨

            abs817902

            Pepstatin A

            10mg/25mg/50mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs811913

            GsMTx4

            1mg/5mg

            現(xiàn)貨

            abs814916

            Gastrin I (human)

            1mg/5mg

            現(xiàn)貨

            abs817694

            A-83-01

            5mg/10mg/25mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810052

            CHIR-99021(CT99021)

            5mg/25mg

            現(xiàn)貨

            abs810473

            DAPT

            5mg/10mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810530

            Dorsomorphin free base

            5mg/50mg

            現(xiàn)貨

            abs810050

            Forskolin

            5mg/25mg/100mg

            現(xiàn)貨

            abs816969

            Nicotinamide

            50mg/100mg/200mg/500mg

            現(xiàn)貨

            abs810009

            SB202190(FHPI)

            5mg/50mg

            現(xiàn)貨

            溫馨提示:Absin所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究,請勿藥物、家用或其他用途。

            Absin特色產(chǎn)品線:


            WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...



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