近期很多老師發(fā)圖咨詢細胞培養(yǎng)時背景的“顆粒"是不是污染，如何去除？今天這篇文章小編帶大家全面解析細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的“顆粒"問題。細胞培養(yǎng)中常見的“顆粒"可分為胞內(nèi)和胞外兩種，下面兩張圖可以直觀地向大家展示：
很多老師因為不清除這些“顆粒"的來源，害怕污染而將細胞丟棄，不僅浪費心力，還耽誤實驗進度，接下來我們逐步分析這些“顆粒"產(chǎn)生的原因。
1、細菌或真菌污染
圖3 污染的細胞
真菌污染相對來說比較好鑒別，一般肉眼可見培養(yǎng)基上層漂浮的霉斑或顯微鏡下可見菌體，細菌的菌體相對較小，顯微鏡下呈棒狀、球狀或者桿狀，由于細菌增值產(chǎn)生酸性物質(zhì)，短期內(nèi)培養(yǎng)基變黃，渾濁，細沙狀沉淀。
2、細胞碎片
圖4 細胞碎片和細菌區(qū)別
消化不當或者PH、滲透壓、溫度的變動可能引起細胞死亡，產(chǎn)生碎片，如何對細菌和細胞碎片辨別？有困難的老師，可以登錄愛必信-產(chǎn)品資訊處或者關(guān)注愛必信公眾號查看往期文章。
3、凋亡小體
圖5 程序性死亡未釋放和正在釋放的凋亡小體
程序性死亡細胞的核DNA在核小體連接處斷裂成核小體片段，形成濃縮的染色質(zhì)塊。隨著染色質(zhì)不斷聚集，核膜在核孔處斷裂，形成核碎片。同時由于不斷脫水，細胞質(zhì)不斷濃縮，細胞體積減小。整個細胞通過發(fā)芽、起泡等方式形成一個球形的突起，并在其根部絞窄而脫落形成一些大小不等，內(nèi)含胞質(zhì)、細胞器及核碎片的小體稱為凋亡小體。
4、支原體集落
支原體無細胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變，極易通過除菌過濾器，單個的支原體無法顯微鏡觀察，目前已知的主要污染源是動物血清、胰酶和已污染培養(yǎng)物的氣溶膠。來源廣泛、不易過濾、難以觀察，給細胞培養(yǎng)帶來了極大隱患。單個的支原體無法從顯微鏡下觀察，支原體集落卻可以被捕捉到。
圖6 被支原體集落“附身"的細胞
5、黑膠蟲
談到黑膠蟲，大家應(yīng)該都對他神秘的“身世"有印象，目前多數(shù)黑膠蟲被鑒定為細菌，黑膠蟲明顯的特征是運動，但是這里小編要提醒大家，支原體集落，可能也會出現(xiàn)運動的現(xiàn)象，詳細的講述可以查看往期文章。
視頻 顫動的黑膠蟲
6、血清中的物質(zhì)
血清反復凍融或者經(jīng)過滅活后，可能會產(chǎn)生“小黑點"，此外不要認為會增多的一定是微生物污染，血清質(zhì)量不好，影響細胞生長，衰老細胞增多形成細胞碎片，也會呈現(xiàn)細胞長勢不佳，黑點增多的現(xiàn)象。
經(jīng)過分析，許多老師肯定又覺得混亂，細胞培養(yǎng)遇到“顆粒"到底如何應(yīng)對？
首先，如果是微生物污染，不重要或者可替代的細胞，我們都建議丟棄，并排查污染來源，被污染的試劑也要丟棄，并且對使用的儀器和環(huán)境進行除菌，比較重要的細胞，可以用含抗生素的緩沖液清洗過后，使用含較高濃度雙抗或三抗培養(yǎng)，嘗試消除，對于支原體和黑膠蟲污染，使用相應(yīng)的支原體清除劑和黑膠蟲清除劑進行處理。
圖7 愛必信污染清除系列產(chǎn)品
其他情況我們建議優(yōu)先排查血清質(zhì)量，特別是更換血清批次的，選擇質(zhì)量好的血清也是細胞培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵所在，除非實驗特殊要求，其他情況下，不建議對血清進行滅活處理。而細胞正常凋亡產(chǎn)生的碎片，可以低俗離心分離完整細胞和細胞碎片，參考條件為300-500rpm 3min，根據(jù)實際情況進行調(diào)整，可以用緩沖液清洗幾次。
圖8 愛必信胎牛血清
最后需要注意的是某些細胞正常培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)一些“顆粒"物質(zhì)，屬于正?，F(xiàn)象，老師們一定要多查閱資料，熟悉培養(yǎng)細胞的特性。
本期就講到這里了，歡迎公眾號后臺留言，一起探討細胞培養(yǎng)問題。
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
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abs47014935 | 細胞消化液（干細胞級別） | 100mL |
abs9244 | 青霉素-鏈霉素溶液(100×雙抗) | 100mL |
abs9245 | 青霉素-鏈霉素-慶大霉素混合溶液(100×三抗) | 100mL |
abs9246 | 青霉素-鏈霉素-兩性霉素B混合溶液(100×三抗) | 100mL |
abs9371 | 水浴鍋抑菌劑 | 100mL |
abs9372 | 培養(yǎng)箱除菌劑 | 480mL |
abs9373 | 細胞房除菌劑 | 480mL |
abs9374 | 水盤抑菌劑 | 20mL |
abs9253 | 支原體清除試劑 | 20mg |
abs9254 | 支原體清除試劑Plus | 10mg |
abs9375 | 支原體清除劑 | 200uL |
abs9376 | 支原體預防劑 | 500uL |
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* 本文圖片來自網(wǎng)絡(luò)，僅供學習參考用
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