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微生物污染是一直是細胞培養(yǎng)的一個主要問題，大到諸如細胞間、層流室這種實驗室的設計布局，小到每一次試劑外包裝的消毒，都是在為了細胞免受外源微生物的侵害。應各位老師們的要求，今天這篇文章主要講解細胞房的除菌方案，順便討論一下常見的無菌操作漏洞。

當您和同門的細胞頻繁出現(xiàn)污染，更換試劑之后仍然不能改善，細胞丟棄一波又一波，建議為細胞間來場消毒吧。無論是紫外線照射（物理方法）還是甲醛加高錳酸鉀熏蒸，都是為了盡可能的殺滅空氣中的微生物。

圖1 細胞室

一、紫外線照射法

紫外線按照波長劃分為四個波段：長波UVA、中波UVB、短波UVC、真空波UVD。波長越長，穿透能力越強，其中UVC（波長200～280nm）被用來做紫外線殺菌燈，可作用于DNA使一條DNA鏈上相鄰的兩個胸腺嘧啶共價結合而形成雙聚體改變了DNA的分子結構，干擾DNA的復制與轉錄導致細菌死亡或變異，缺點也是顯而易見的，UVC穿透力差，無法穿透大部分的透明玻璃及塑料，同時短時間照射即可灼傷皮膚，長期或高強度照射還會造成皮膚癌。

圖2

這里提示在購買紫外線消毒燈的時候登錄全國消毒產(chǎn)品網(wǎng)上備案信息服務平臺查詢備案，可以看到生產(chǎn)許可證，檢測報告等信息。

具體可參照：約13m²的房間30w紫外燈（距地面約2.5m）照射1h，照射前抹凈燈管灰塵，建議一周一次。照射時人員禁止入內(nèi)。

圖3 消毒產(chǎn)品網(wǎng)上備案信息

二、甲醛加高錳酸鉀熏蒸法

甲醛無易燃易爆危險易于獲得故在消毒與滅菌方面使用較為普遍。醛類主要通過凝固蛋白質還原氨基酸使蛋白質分子烷基化而殺滅細菌和其他微生物，KMnO4是一個強氧化劑，它會使得菌體酶蛋白失去活性，代謝機能障礙而死亡。這種方法的缺點是醛蒸氣刺激性較大對人體有害，是致癌物質，并且對呼吸道的刺激較大。具體可參照：每立方米加甲醛80ml：高錳酸鉀40g（2:1的比例），一定要先將高錳酸鉀倒入敞口容器，再加入40%的甲醛！密閉熏蒸24h左右，充分通風（至少24h）在確保細胞房內(nèi)沒有甲醛的刺激性氣味后實驗人員才能進入。

安全提示：動作要迅速，兩者反應較強烈，做好防護，注意不要濺到！甲醛遇到KMnO4會產(chǎn)生強烈的氧化反應，濺出來是很危險的，所以一定要使用敞口容器?。?！

兩者相比，甲醛熏蒸法效果更好，特別對于一些較難消除的真菌，但是由于甲醛的致癌性，不建議頻繁使用，可以結合紫外線照射法交替進行。

三、細胞房除菌劑

在進行紫外線照射或者甲醛熏蒸之前，需要對細胞間各個角落進行擦拭，愛必信細胞房清除劑，用于細菌、真菌清除，具有很強的抑菌功能，可用于細胞房的污染控制，通過清除細胞房內(nèi)細菌、真菌及其孢子，可有效防止細胞的污染。

圖4 細胞房除菌劑

使用方法：

1）直接對細胞房的死角、墻面、空間進行噴灑，也可倒出少許，將脫脂棉球浸泡后擦拭使用。 建議一周處理一次，配合紫外線使用效果更佳。
2）建議每立方米(m^3)使用量為5~8mL，如10m^2、高3m的房間推薦用量為150mL。遇污染爆發(fā)時期，如梅雨季節(jié)等，可適當增加用量。若室內(nèi)墻壁上有霉菌生長，可噴灑于墻壁表面，或者用浸泡后的棉球擦拭。

溫馨提示：

1）操作時，穿戴適當?shù)姆雷o服和手套操作；
2）處理后，人盡量遠離細胞培養(yǎng)室，待密封20~30 min 通風 10min 后再使用；
3）避免直接接觸皮膚、眼睛，一旦接觸，應立即用大量的清水沖洗，不要延誤。

圖5 實驗室清潔劑

[1] 劉水平,羅志勇.細胞培養(yǎng)室空氣消毒效果的檢測[J].生物醫(yī)學工程研究,2006(01):53-54.

今天的講解就到這里啦，感興趣的老師們可以公眾號“愛必信生物"后臺留言哦。

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