免疫 (共) 沉淀 (IP/CoIP)
是基于抗體和蛋白的特異性親和作用，通過捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體，進而從復雜的樣品中捕獲及富集目標蛋白，同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子的一種技術。
瓊脂糖珠VS磁珠
瓊脂糖珠作為免疫沉淀實驗中的固相支持物已經(jīng)歷經(jīng)多年，隨著實驗技術的發(fā)展，磁珠開始大幅取代瓊脂糖珠，成為免疫沉淀純化方法的首先選擇，許多剛接觸的研究者都要面臨方法選擇的問題，磁珠法VS瓊脂糖珠法，區(qū)別在哪里？分別有什么優(yōu)缺點？
圖1 瓊脂糖珠結(jié)構(gòu)
圖2 磁珠
區(qū)別：
1、抗體結(jié)合量：瓊脂糖珠（直徑50-150μm）明顯大于磁珠（直徑1-4μm），所以單個瓊脂糖珠結(jié)合抗體的量大于磁珠，但是磁珠每體積的磁珠比瓊脂糖珠的量多；
2、結(jié)合能力：瓊脂糖珠是多孔的海綿狀結(jié)果，與抗體的結(jié)合能力優(yōu)于磁珠；
3、非特異性結(jié)合：瓊脂糖珠的非特異性結(jié)合比磁珠多，樣品中的非目的蛋白或者抗體的任何部位都可能與之結(jié)合，所以在瓊脂糖珠法中，樣品的預處理非常重要；
4、抗體的損耗：瓊脂糖珠大于磁珠，由于瓊脂糖珠的多孔結(jié)構(gòu)，抗體很容易被困其中，并且，離心洗滌的過程中很容易流失；
5、實驗時間：磁珠法可室溫短時間孵育（僅限Absin abs9649和abs955的比較）；
6、特殊設備：磁珠法需要自備磁力架。
abs9649（磁珠法）和abs955（瓊脂糖珠法）常見問題：
圖 abs9649免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒(磁珠法)
圖 abs955免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒
以下問題僅針對愛必信現(xiàn)有兩款試劑盒abs9649和abs955
一、樣品處理
1、兩個試劑盒中l(wèi)ysis buffer都要添加PMSF嗎，怎么使用？
兩個試劑盒中的PMSF都要額外準備，推薦abs9146，根據(jù)使用量，取每1mL lysis buffer加入10ul PMSF（100mM，溶解174mg的abs9146于足量的異丙醇中，定容到10mL，分裝成小份貯存于-20℃。）使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用 （PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。磁珠法緩沖液請按說明書配置后使用，buffer稀釋均可用超純水。
2、abs9649如果沒有超聲破碎儀的話，能不能用酶解的辦法破碎細胞？
酶解和超聲都可以，酶按照實驗室正常使用濃度配制即可。
3、蛋白的量如何估算？
可以使用BCA蛋白定量試劑盒(abs9232)。
4、如果我的細胞裂解物里面蛋白含量高于試劑盒要求的總蛋白含量，我應該用什么試劑進行稀釋呢？
常規(guī)用PBS稀釋即可。
二、如何減輕瓊脂糖珠非特異性吸附？
可以通過多次洗滌，和樣品預處理（適當延長Protein A和Protein G的孵育時間）來降低背景，但應注意，選擇此步驟后，試劑盒中protein A和protein G對應實驗樣本數(shù)減半。
三、結(jié)合過程中，4℃混合過夜孵育可用什么儀器？
可以用混合儀abs72030或abs72019。
圖 abs72019旋轉(zhuǎn)混合儀(XHE-100)
四、abs955中beads出現(xiàn)吸不出來的情況，怎么處理？
吸之前需注意槍頭要剪一下再吸，如若beads吸不上來，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。
五、如果我后續(xù)是想要跑native膠，不做變性電泳，如何選擇樣品緩沖液？
用不含有SDS的WB上樣緩沖液，但不經(jīng)過變性，蛋白能否解離下來，我們無法確定，不能保證您后續(xù)的實驗效果。
六、磁珠法兩種洗脫方案的區(qū)別？
兩種洗脫方案均包含捕獲抗體及目的抗原，低pH 洗脫樣本中抗體為完整結(jié)構(gòu)，變性洗脫樣本中抗體解離為重鏈、輕鏈，請根據(jù)后續(xù)實驗需求選擇洗脫方案。
*文中圖片來源于網(wǎng)絡，僅供學習參考用
IP&WB全套試劑清單推薦：
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 貨期 |
abs955 | 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒 | 50T | 現(xiàn)貨 |
abs9649 | 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒(磁珠法) | 50T | 現(xiàn)貨 |
abs9146 | PMSF | 100g | 現(xiàn)貨 |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL | 現(xiàn)貨 |
abs9239 | 免疫印跡及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑) | 100mL | 現(xiàn)貨 |
abs20035 | Rabbit IgG Antibody | 10mg | 現(xiàn)貨 |
abs20038 | Mouse IgG Antibody | 1mg | 現(xiàn)貨 |
abs9232 | BCA蛋白定量試劑盒 | 500T | 現(xiàn)貨 |
abs924 | 預染蛋白marker, 10-180kDa | 250uL | 現(xiàn)貨 |
abs950 | 電轉(zhuǎn)液(10×) | 1L | 現(xiàn)貨 |
abs954 | WB專用一抗二抗稀釋液 | 100mL | 現(xiàn)貨 |
abs961 | PBS緩沖液(10×) | 500mL | 現(xiàn)貨 |
abs952 | TBST(10×) | 1L | 現(xiàn)貨 |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | 現(xiàn)貨 |
abs920 | ECL化學發(fā)光檢測試劑盒 | 250mL×2 | 現(xiàn)貨 |
好消息！Absin文獻獎勵重磅升級！
Absin特色產(chǎn)品線：
WB相關：ECL發(fā)光液、預染marker、預制膠；IHC相關：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體；定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
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