1、什么是蛋白marker？
蛋白Marker，也稱為蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（Protein Molecular Weight Marker），是用于蛋白質(zhì)電泳分析中的一系列已知分子量的蛋白質(zhì)混合物。它們通常包含多個不同分子量的蛋白質(zhì)條帶，這些條帶在電泳過程中會根據(jù)分子量的大小和電荷差異遷移不同的距離，從而在凝膠上形成一系列有序的條帶。
2、Marker在WB中的作用？
分子量標(biāo)定：Marker包含一系列已知分子量的蛋白質(zhì)，通過與Marker上的帶狀蛋白質(zhì)帶進(jìn)行比較，可以精確地確定待測蛋白的分子量；
驗證電泳和轉(zhuǎn)印效果：Marker在電泳和轉(zhuǎn)印的過程中移動到膜上，可以幫助研究者驗證這些步驟的效果。通過檢查Marker的帶狀分布，可以確保電泳和轉(zhuǎn)印過程中沒有發(fā)生異常；
確定蛋白質(zhì)遷移距離：通過測量Marker的遷移距離，可以估算待測蛋白質(zhì)的遷移距離。這對于進(jìn)一步的數(shù)據(jù)分析和結(jié)果解釋非常重要；
標(biāo)定凝膠濃度：Marker還可以用于幫助研究者選擇適當(dāng)?shù)哪z濃度。不同分子量的Marker在不同的凝膠濃度下會產(chǎn)生不同的遷移模式，因此可以根據(jù)Marker的遷移特性選擇合適的凝膠濃度。
3、Marker有哪些分類，各有什么特點？
● 天然蛋白Marker：
這類Marker是從自然來源提取的蛋白質(zhì)，它們經(jīng)歷了天然的修飾過程，如裂解、二硫鍵形成、糖基化或磷酸化，并保持其復(fù)雜的3D結(jié)構(gòu)。天然蛋白Marker更接近其在體內(nèi)的自然狀態(tài)，這使得它們在藥物開發(fā)和生物醫(yī)學(xué)研究中非常有用。天然蛋白Marker可以提供更準(zhǔn)確的分子量估計，因為它們未經(jīng)過重組或合成，保持了蛋白質(zhì)的自然特性。abs9919非變性蛋白Marker (66-669kDa)，經(jīng)過非變性電泳后，用考馬斯亮藍(lán)染色后可以得到分布均勻、密度相近的4條帶，不適用于SDS-Page，因為在SDS存在下，含有多個亞單位的蛋白會不同程度解聚。
abs9919非變性蛋白Marker(66-669kDa)
● 變性Marker：
這類Marker在生產(chǎn)過程中經(jīng)過了變性處理，通常是通過加熱和化學(xué)物質(zhì)（如SDS）的處理，以確保蛋白質(zhì)wan全展開成線性結(jié)構(gòu)。變性Marker的優(yōu)點在于它們提供了一致的蛋白質(zhì)遷移特性，這對于精確的分子量估計和實驗重復(fù)性非常重要。由于變性處理，這類Marker的蛋白質(zhì)保持一致的電荷和形狀，使得它們在電泳過程中的遷移更加可預(yù)測。
變性蛋白Marker一般可分為預(yù)染和非預(yù)染兩種
● 未預(yù)染蛋白Marker：
這類Marker包括寬分子量、高分子量和低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)。它們是較簡單、較準(zhǔn)確的一種，因為不附帶染料分子或標(biāo)記分子，所以所示大小正好是蛋白原本的大小。缺點是在電泳過程中不可見，需要在電泳結(jié)束后經(jīng)過染色才能看到，無法實時監(jiān)控電泳過程。適合精確判斷蛋白大小，但操作相對麻煩，需要額外的染色步驟。如abs9840非預(yù)染蛋白Marker (14.4-97.4kDa)，用考馬斯亮藍(lán)R-250染色可得分布均勻密度相同的六個條帶，產(chǎn)品含SDS, 不適合用于非變性膠。
abs9840非預(yù)染蛋白Marker(14.4-97.4kDa)
● 預(yù)染蛋白Marker：
這類Marker在生產(chǎn)時就結(jié)合了染料，因此在電泳過程中或轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到不同顏色的條帶。預(yù)染蛋白Marker方便實驗人員在電泳時、電泳后，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率。又分為單色預(yù)染和多色預(yù)染。單色預(yù)染Marker通常會利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小，而多色預(yù)染Marker用不同的顏色來區(qū)別，更易于辨認(rèn) 。需要注意的是，預(yù)染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián)，所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化，可能導(dǎo)致一些偏差，因此不太適合精確定位蛋白。
abs923預(yù)染蛋白Marker(10-245kDa)
● 預(yù)染發(fā)光Western Marker：
傳統(tǒng)的Western Blot試驗需要使用預(yù)染蛋白Marker來跟蹤檢測陽性抗原信號和轉(zhuǎn)膜效率，但預(yù)染蛋白Marker無法在膠片上曝光，曝光信號需要根據(jù)膜上的預(yù)染蛋白Marker來判斷。absin新品abs90004 預(yù)染發(fā)光Western Marker由9種發(fā)光蛋白和9種預(yù)染蛋白組成；9中發(fā)光蛋白分別為23、30、36、44、50、62、90、120和160KDa，這些蛋白均可與抗體結(jié)合，因此能與抗原在同一張膜上曝出信號，陽性信號可以直接通過Western Marker的位置來判斷；9種預(yù)染蛋白分別為15、25、35、40、55、70、100、130和180KDa，其中70KDa為紅色，其他為藍(lán)色，轉(zhuǎn)膜完畢后在膜上肉眼可見。
1）可與抗原同時檢測信號，使Western blot結(jié)果判斷更加簡便；
2）發(fā)光marker沒有偶聯(lián)和標(biāo)記其他分子，分子量更加準(zhǔn)確；
3）綜合發(fā)光marker和預(yù)染marker的優(yōu)勢，既能監(jiān)測轉(zhuǎn)膜又能與抗原同時檢測。
HRP標(biāo)記的Goat anti mouse IgG二抗(一抗：mouse anti P38)ECL化學(xué)發(fā)光檢測
多重?zé)晒鈾z測
按照分子量又可以將marker分為高分子量、低分子量、寬分子量等。高分子量蛋白Marker是指那些用于檢測大分子量蛋白質(zhì)的標(biāo)記，通常包含的蛋白質(zhì)分子量范圍較高，它們提供的分子量范圍通常從幾十kDa到幾百kDa不等。低分子量蛋白Marker是指用于檢測小分子量蛋白質(zhì)的標(biāo)記，通常包含的蛋白質(zhì)分子量范圍較低，從幾kDa到幾十kDa的分子量范圍。寬分子量蛋白Marker是指覆蓋寬廣分子量范圍的標(biāo)記，通常包含從低到高多個分子量的蛋白質(zhì)。
4、如何選擇marker？需要考慮什么因素？
首先看實驗類型，非變性蛋白需要非變性蛋白marker，變性蛋白則需要變性marker，兩者不可以相互替換，然后看目的蛋白大小，選擇相應(yīng)的marker，在可選條件下，寬分子量蛋白marker，是不錯的選擇，另外看實驗要求，如果需要在電泳和轉(zhuǎn)印過程中檢測，需要選擇預(yù)染marker，如果需要精確的條帶分子量大小，則需要非預(yù)染marker做參考，可以同時使用預(yù)染marker和非預(yù)染marker，除了以上因素，還需要考慮marker的使用體系，absin常見marker信息如下：
類型 | 非變性蛋白marker | 非預(yù)染蛋白 Marker | 藍(lán)色預(yù)染蛋白 Marker | 多色預(yù)染蛋白Marker | 預(yù)染發(fā)光Western Marker | |||
貨號 | abs9919 | abs9840 | abs9511 | abs9859 | abs922 | abs923 | abs924 | abs90004 |
分離量范圍 | 66-669kDa | 14.4-97.4kDa | 3.3-31kDa | 14.4-97.4kDa | 10-180kDa | 10-245kDa(Tris-glycine-SDS) | 10-180kDa | 發(fā)光蛋白：23-160kDa 預(yù)染蛋白：15-180kDa |
條帶數(shù)量 | 4 | 6 | 5 | 6 | 10(10和17可能因為膠濃度原因跑不開) | 12 | 10(10和17可能因為膠濃度原因跑不開) | 9 |
條帶分子量 | 66、238、440、669 | 14.4、22、31、43、66.2、97.4 | 3.3、6.5、14.4、20.1、31 | 14.4、20.1、31、43、66.2、97.4 | 10, 17, 25, 33, 43, 55，75, 95, 130,180 | 11、17、20、25、35、48、63、75、100、135、180、135、180、245（Tris-glycine-SDS） | 10, 17, 25, 33, 43, 55，75, 95, 130,180 | 發(fā)光蛋白： 23、30、36、44、50、62、90、120 、 160 預(yù)染蛋白： 15、25、35、40、55、70、100、130 、 180 |
顏色 | 單色 | 單色 | 藍(lán)色 | 藍(lán)色 | 75紅色，25k綠色，其余藍(lán)色 | 25綠色，75橙紅色，其余藍(lán)色 | 72橙色，10綠色，其余藍(lán)色，10k條帶在15%以下膠濃度時深綠色 | 預(yù)染蛋白70KDa為紅色，其他為藍(lán)色， |
推薦凝膠體系 | 非變性電泳 | 變性電泳 | Tricine SDS-PAGE | Tris-Glycine，Bis-Tris，Tris-Acetate，藍(lán)色和綠色條帶表觀分子量無變化，橙色條帶和進(jìn)口一致 | Tris-Glycine，Bis-Tris，Tris-Acetate，藍(lán)色和綠色條帶表觀分子量無變化，橙色條帶和進(jìn)口一致 | Tris-Glycine | Tris-Glycine，Bis-Tris，Tris-Acetate，藍(lán)色和綠色條帶表觀分子量無變化，橙色條帶和進(jìn)口一致 | Tris-Glycine，Bis-Tris等 |
處理 | 需要考馬斯亮藍(lán)染色，不能加熱 | 需要考馬斯亮藍(lán)染色及上樣前沸水浴 | 無需染色，勿加熱 | 無需染色、無需加熱 | 無需染色、直接使用，不要煮沸、稀釋和加入還原劑處理 | 無需染色、無需加熱 | 無需染色、直接使用，不要煮沸、稀釋和加入還原劑處理 | 無需染色、直接使用，不要煮沸 |
非變性蛋白電泳好物推薦
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL |
abs9360 | Tris-Glycine電泳緩沖液(10×) | 500mL |
abs9618 | Glass gel預(yù)制膠 Tris-Gly 15%, 10wells, 1.5mm | 10片/盒 |
abs9954 | 非變性非還原性蛋白上樣緩沖液(5×) | 1mL×5 |
abs9919 | 非變性蛋白 Marker(66-669kDa) | 200uL |
abs964 | 考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒(常規(guī)型) | 1kit |
WB好物推薦
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
樣本處理 | abs9346 | 細(xì)胞漿、細(xì)胞核及細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒 | 50T |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL | |
abs9162 | 廣譜型磷酸酶抑制劑混合物(100×儲液) | 1mL | |
abs9161 | 廣譜型蛋白酶抑制劑混合物(不含EDTA,100×DMSO儲液) | 1mL | |
蛋白定量 | abs9232 | BCA蛋白定量試劑盒 | 500T |
膠 | 配膠試劑盒,各類預(yù)制膠(參考前面表格) | ||
上樣與電泳 | abs953 | 上樣緩沖液(2×) | 10mL |
abs951 | 電泳液(10×) | 100mL | |
abs923 | 預(yù)染蛋白Marker(10-245kDa) | 500uL | |
轉(zhuǎn)膜 | abs932 | PVDF膜(0.45μm) | 20張 |
abs960 | NC膜(0.45μm) | 20張 | |
abs950 | 電轉(zhuǎn)液(10×) | 100mL | |
封閉 | abs9175 | 脫脂奶粉 | 500g |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | |
抗體稀釋與去除 | abs954 | WB專用一抗二抗稀釋液 | 100mL |
abs967 | Western一抗二抗去除液(強(qiáng)堿性) | 500mL | |
顯色與檢測 | abs920 | ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒 | 25mL×2 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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