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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| HPAC (胰腺腺泡上皮癌) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0359 |
商品介紹：
名稱 HPAC (胰腺腺泡上皮癌) 別稱Hpac 年齡（性別）64歲 組織來源胰腺 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM/F12＋2μg/ml Insulin＋5μg/ml Transferrin＋40ng/ml Hydrocortisone＋10ng/ml EGF＋5% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~23-44 hours 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, the cells form tumors in athymic nude mice at the site of inoculation which are histologically similar to the tumor of origin. Yes, the cells have a colony forming efficiency of 64% on plastic and 3.2% in agarose. 受體表達情況epidermal growth factor (EGF), expressed; glucocorticoid, expressed; epidermal growth factor (EGF); glucocorticoid 基因表達情況HPAC cells are positive for keratin and negative for vimentin and chromogranin A. |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
MSL1 基因全長ORF克隆
DTX3 基因全長ORF克隆
PRICKLE4 基因全長ORF克隆
DMC1 基因全長ORF克隆
A4GNT 基因全長ORF克隆
PRSS48 基因全長ORF克隆
OR1E2 基因全長ORF克隆
NPL 基因全長ORF克隆
BSND 基因全長ORF克隆
ANXA13 基因全長ORF克隆
HPAC (胰腺腺泡上皮癌)10g N-2- -N’-3- 丙磺酸 HEPPS 室溫避光保存
250mL Carbonate Buffer（鹽緩沖液）,0.5M,pH9.4 Carbonate Buffer,0.5M,pH9.4 常溫保存
50mL 剝離硅烷 Repeling Silane 常溫
2 ug pGro7 pGro7 低溫運輸，-20℃保存
RV肉湯（EP） Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth 250g
1瓶 HOS細胞株 HOS 低溫運輸和保存
菌種保存和標本運送培養(yǎng)基
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