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一、產(chǎn)品簡介

英諾思(immuno-X)人CD3/CD28激活磁珠用于激活人T細胞，促進T細胞增值和T細胞分化。該產(chǎn)品利用三維立體磁珠模擬抗原呈遞細胞對T細胞的激活，ActBeads™ 提供的第一信號（CD3）和第二信號（CD28）使得T細胞高效擴增，避免T耗竭。
• ActBeads™ 激活磁珠濃度為4x107個/mL
• 磁珠粒徑均yi，流式細胞儀分析時可與T細胞明顯區(qū)分

二、試劑盒組分

產(chǎn)品名稱	存儲條件	緩沖液成分	功能
ActBeads™ Human CD3/CD28 Activator	4°C保存，避免冷凍	PBS, 0.1% BSA	通過磁珠偶聯(lián)的CD3/CD28抗體激活T細胞，促進T細胞增值和分化

BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline

運輸條件： 4°C運輸

三、培養(yǎng)條件

·緩沖液：RPMI1640 培養(yǎng)基+10% FBS + 2 mM L-Glutamine+100 U/mL penicillin/streptomycin

·細胞因子：人IL2細胞因子

四、溫馨提示

·T細胞分離時，確保FACS Buffer滲透壓穩(wěn)定，免疫細胞對滲透壓非常敏感

·IL7、IL15可與IL2聯(lián)合使用，促進T細胞增值

五、實驗步驟

1. 激活或者擴增T細胞

步驟	說明
1	分離人T細胞，將其鋪到96孔平底培養(yǎng)板中，細胞密度為8 x 104/孔，培養(yǎng)基200 μL
2	ActBeads™ 人CD3/CD28激活磁珠震蕩混勻后，加入到細胞中，2 μL/孔 Note: 激活或擴增T細胞時，ActBeads TM和細胞比例為1:1；誘導Treg細胞分化時，磁珠和細胞的比例應增加到2:1
3	加入IL2細胞因子，終濃度為100 U/mL
4	進行T細胞培養(yǎng)，5% 二氧化碳，37℃
5	培養(yǎng)48小時后，T細胞體積變大，形態(tài)多樣
6	當細胞密度較大時，更換新鮮培養(yǎng)基或者將細胞轉移至新的培養(yǎng)板

2. T細胞重新刺激

通常T細胞在擴增到第7-10天時，需要通過添加新鮮的ActBeads™ 和IL-2進行多次重新刺激。經(jīng)過反復重新刺激后，CD8+ T細胞仍保持細胞毒性。

步驟	說明
1	將T細胞重懸后置于無菌離心管中，在磁力架上吸附2分鐘
2	倒出/吸出T細胞，進行細胞計數(shù)
3	將T細胞重新鋪到培養(yǎng)板中，密度0.5–1 × 106 cells/mL
4	培養(yǎng)，5% 二氧化碳，37℃