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上海仁捷生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·9年您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 公司動(dòng)態(tài)> 二胺氧化酶（DAO），牛ELISA試劑盒檢測(cè)原理
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牛二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)：Bovine DAO ELISA Kit
實(shí)驗(yàn)類(lèi)型：夾心法
檢測(cè)范圍：0.75 U/mL – 24 U/mL
zui低檢測(cè)限：0.1 U/mL
應(yīng)用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科研及非臨床用途）
牛二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒僅供研究使用
牛二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中牛二胺氧化酶（DAO）的含量。
有效期：6個(gè)月
保存條件：2-8℃
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被牛二胺氧化酶（DAO）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛二胺氧化酶（DAO）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
牛二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒組成
| 試劑盒組成 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
|---|---|---|---|
| 微孔酶標(biāo)板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無(wú) |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 | 無(wú) |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
| 檢測(cè)抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無(wú) |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無(wú) |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 | 無(wú) |
| 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無(wú) |
備注：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：24、12、6、3、1.5、0 U/mL
2. 經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
樣本處理及要求
1. 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
