ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多，更加方便我們的科研學(xué)者進行科學(xué)實驗，是科研實驗的好伙伴。

實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備；
2. 加樣（標準品及樣本）100µL，37°C孵育1小時；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。

樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
注意事項：
1.加樣：
①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)"，因此盡量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結(jié)果，酶標儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進行測試。

SP6 RNA Polymerase規(guī)格：2000 units

SP6 RNA Polymerase, HC規(guī)格：5000 units

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase規(guī)格：500 units

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase規(guī)格：2500 units

M-MuLV Reverse Transcriptase規(guī)格：1000 units

M-MuLV Reverse Transcriptase規(guī)格：5000 units

Taq DNA Polymerase (recombinant)規(guī)格：500 units

Taq DNA Polymerase, LC (recombinant)規(guī)格：500 units

Taq DNA Polymerase (recombinant)規(guī)格：5x500 units

Taq DNA Polymerase (recombinant)規(guī)格：10x500 units

Klenow Fragment, exo–規(guī)格：300 units

Klenow Fragment, exo–規(guī)格：1500 units

RevertAid™ Reverse Transcriptase規(guī)格：10000 units

RevertAid™ Reverse Transcriptase規(guī)格：10000 units

RevertAid™ Reverse Transcriptase規(guī)格：5x10000 units

RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase規(guī)格：10000 units

RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase規(guī)格：5x10000 units

Pfu DNA Polymerase (recombinant)規(guī)格：100 units

Pfu DNA Polymerase (recombinant)規(guī)格：500 units

Pfu DNA Polymerase (native)規(guī)格：100 units

Pfu DNA Polymerase (native)規(guī)格：500 units

TrueStart™ Hot Start Taq DNA Polymerase規(guī)格：200 units

TrueStart™ Hot Start Taq DNA Polymerase規(guī)格：500 units

TrueStart™ Hot Start Taq DNA Polymerase規(guī)格：5x500 units

Bsm DNA Polymerase, Large Fragment規(guī)格：1600 units

DreamTaq™ DNA Polymerase規(guī)格：200 units

DreamTaq™ DNA Polymerase規(guī)格：500 units

DreamTaq™ DNA Polymerase規(guī)格：5x500 units

DreamTaq™ DNA Polymerase規(guī)格：20x500 units

DreamTaq™ Green DNA Polymerase規(guī)格：200 units

DreamTaq™ Green DNA Polymerase規(guī)格：500 units

DreamTaq™ Green DNA Polymerase規(guī)格：5x500 units

DreamTaq™ Green DNA Polymerase規(guī)格：20x500 units

RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase規(guī)格：2000 units

RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase規(guī)格：10000 units

RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase規(guī)格：4x10000 units

Maxima® Reverse Transcriptase規(guī)格：2000 units

Maxima® Reverse Transcriptase規(guī)格：10000 units

Maxima® Reverse Transcriptase規(guī)格：4x10000 units

使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。*，酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。