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詳細(xì)介紹
實驗流程:
1. 實驗前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL，37°C孵育1小時；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多，更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實驗，是科研實驗的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
NGF ELISA Kit | GOY-E100146 |
樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
注意事項：
1.加樣：
①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。
烏藥 訂購|咨詢 規(guī)格： 10mg 糖原蛋白1 FBN2 ELISA Kit 肌原纖蛋白2(FBN2)ELISA試劑盒
異香草醛(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 Isovanillin 小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
羅通定 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白抗體 Anti-GHAb ELISA Kit 人抗生長激素抗體(Anti-GHAb)ELISA試劑盒
4-基鄰二腈(>98.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 4-Nitrophthalonitrile 根瘤菌 Rhizobium sp.
花椒酚;Xanthotol 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg F-box蛋白家族FBXO18抗體 EDN1 ELISA Kit 內(nèi)皮素1(EDN1)ELISA試劑盒
枸杞多糖 訂購|咨詢 規(guī)格： ;500mg 鐵簇整合同源物2蛋白抗體 DEFβ133 ELISA Kit 防御素β133(DEFβ133)ELISA試劑盒
炔諾 質(zhì)量規(guī)格：>97% Norethindrone 人成骨肉瘤細(xì)胞雙環(huán)林地菇 Agaricus placomyces
纖維結(jié)合素樣神經(jīng)肽；分裂FLRF酰胺 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR FMRF-like Neuropeptide;Schisto FLRF amide 鼠桿菌 Lactobacillus murinus球菌霍氏亞種 Lactococcus lactis subsp. hordniae
素 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg 真核翻譯起始因子5抗體 PRSS8 ELISA Kit 絲氨蛋白酶8(PRSS8)ELISA試劑盒
鹽野靛堿 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢 人前神經(jīng)肽Y(NPY)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒，英文名：Cav-1 ELISA Kit
噻嗪苷 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%；5mg/支 化HER4抗體 CHST6 ELISA Kit 糖基轉(zhuǎn)移酶6(CHST6)ELISA試劑盒
廣防已 英文名稱：Aristolochia Fangchi 保存：-20℃ 規(guī)格：3g 血小板衍化生長因子β抗體
和厚樸酚 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg 化叉頭蛋白4抗體 ZG16B ELISA Kit 酶原粒蛋白16同源物B(ZG16B)ELISA試劑盒
NGF的神經(jīng)生長因子ELISA KitDEV nutrient agar for microbiology DEV營養(yǎng)瓊脂 1.11471.0500MERCK默克
BAIRD-PARKER agar Staphylococcus selective agar base acc.to 1.05406.0500MERCK默克
T1N3肉湯 250(g)
EF-18瓊脂 250(g)
改良Camp-BAP瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
DRBC 瓊脂基礎(chǔ) (CM0727) Oxoid
馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (CM0139) Oxoid
胰酶-EDTA，
0.25%胰酶，EDTA。4Na 不含鈣鎂離子，含酚紅
保存：-5 - -20°
Potato Dextrose Agar
Enterobacteriac enrichment broth acc.to MOSSEL腸桿菌富集肉湯 1.05394.0500MERCK默克
M-ENDO broth 膜過濾ENDO肉湯 1.10750.0500MERCK默克
使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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