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兩種乙酰膽堿受體自身抗體檢測法比較：酶聯(lián)免疫法與放射免疫法
閱讀：1910 發(fā)布時(shí)間：2022-3-28煙堿型乙酰膽堿受體自身抗體(AChR Ab)是重癥肌無力(MG)的重要血清學(xué)標(biāo)志物，血清中AChR Ab的檢測對(duì)MG的診斷和治療有重要意義。本文比較了兩種測定AChR Ab的方法：放射免疫法（IPA）和酶聯(lián)免疫法（競爭ELISA）。
在本研究中，在83例MG患者血清中，76例血清在ELISA法中呈陽性 (陽性率92%)，72例在IPA法中呈陽性 (陽性率87%)；在193例對(duì)照血清（疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組）中，191/193例（99%）呈陰性，2例其他自身免疫性疾病的患者血清呈陽性（在對(duì)照組中，ELISA法和IPA法的結(jié)果一致）。
RSR的AChR Ab競爭ELISA法與現(xiàn)有金標(biāo)準(zhǔn)-放射免疫法特異性相同，靈敏度更高。此外，競爭ELISA的精密度和操作特性使其適用于大批量和小批量樣品的常規(guī)測定。
入組樣本
1） MG疾病組：83例MG患者的血清（IPA檢測的AChR Ab濃度范圍在0.14到21 nmol/L 毒素結(jié)合量）；
2）疾病對(duì)照組：93例其他自身免疫性疾病患者的血清（包括42例Graves病患者血清TSHR (TR Ab)自身抗體陽性，11例橋本甲狀腺炎患者血清甲狀腺過氧化物酶自身抗體(TPO Ab)和/或甲狀腺球蛋白自身抗體(Tg Ab)陽性，10例1型糖尿病（DM）患者血清谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD Ab)陽性，10例阿狄森氏病（AD）患者血清類固醇21-羥化酶自身抗體(21-OH Ab)陽性，10例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RF)患者血清類風(fēng)濕因子(RFA)陽性，10例系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清雙鏈DNA自身抗體(dsDNA Ab)陽性）。
上述患者組的標(biāo)志物中，除類風(fēng)濕因子使用Behring試劑盒測定外，其他自身抗體均采用RSR公司的試劑盒檢測。
3）健康對(duì)照組：100例健康獻(xiàn)血者(HBD)的血清（美國，Golden West）。
結(jié)果
01 ELISA法和IPA法對(duì)比
總體而言，在MG疾病組的檢測上，兩種檢測方法（ELISA法和IPA法）的結(jié)果吻合良好(r=0.85, n=83, p<0.001)（圖1）。
圖1 ELISA和放射免疫法（IPA）AChRAb檢測結(jié)果的相關(guān)性分析。y=0.31510.0364x；r=0.85；n=83。（A） 全尺寸。（B） 局部放大圖。水平和垂直虛線分別顯示ELISA和IPA臨界值。
02 靈敏度分析
83例MG患者血清中有80例 (96%) 在一種或兩種檢測中均呈陽性。在83例MG患者血清中，76例血清在ELISA法中呈陽性 (陽性率92%)，72例在IPA法中呈陽性 (陽性率87%)。與IPA法（n =72）相比，使用ELISA 法(n=76)檢測到更多的MG患者樣本呈AChRAb陽性（表1）。
表1 在83例MG組中IPA和ELISA法的檢測結(jié)果
差異樣本分析：
ELISA陽性，IPA陰性：8例血清在ELISA法中呈陽性(抑制率范圍為18 ~ 46%)，而在IPA法中呈陰性(0.33 ~ 0.47 nmol/L毒素結(jié)合量)。
ELISA陰性，IPA陽性：4例血清樣本在IPA法檢測中呈陽性(0.56、0.61、1.44和2.91 nmol/L毒素結(jié)合量)，在ELISA檢測中呈陰性(抑制率分別為14%、15%、8%和-1%)。在4個(gè)血清樣本中，其中兩例的雙方法學(xué)檢測結(jié)果都處于臨界值附近；另外兩例在IPA結(jié)果中，為AChR Ab弱陽性值 (1.4 和2.9 nmol/L)，這兩個(gè)樣本在IPA法檢測時(shí)被發(fā)現(xiàn)與胎兒型乙酰膽堿受體結(jié)合（數(shù)據(jù)未顯示），可能表明這兩個(gè)樣本中的AChR Ab結(jié)合到了我們ELISA實(shí)驗(yàn)中使用的3種單抗無法識(shí)別的位點(diǎn)上。
03 特異性分析
在其他疾病對(duì)照組和健康對(duì)照組的檢測中，ELISA法和IPA法的定性結(jié)果始終保持一致。
其他疾病對(duì)照組：在93例其他自身免疫性疾病患者（詳情見前面入組樣本部分）中，91/93例（特異性 98%）患者檢測結(jié)果為AChRAb陰性。兩例患者檢測結(jié)果為AChRAb陽性，分別為一例Graves病患者(ELISA法顯示28%抑制率，IPA法結(jié)果為1.3nmol/L 毒素結(jié)合量 )和一例系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者(ELISA法顯示44%抑制率，IPA結(jié)果為1.3nmol/L 毒素結(jié)合量)。
健康對(duì)照組：100例健康供血者中，100例（特異性 100%）均為抗體陰性。
03 批內(nèi)和批間精密度分析
競爭法AChR Ab酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的批間變異系數(shù)(CV)如下：
競爭法AChR Ab酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的批間和批內(nèi)變異系數(shù)(CV)結(jié)果顯示，低濃度樣本的批間和批內(nèi)差大于高濃度的樣本，是由于低濃度樣本的平均值偏小，CV的計(jì)算公式為標(biāo)準(zhǔn)差除以平均值。
原文：Hewer R , Matthews I , Shu C , et al. A sensitive non-isotopic assay for acetylcholine receptor autoantibodies[J]. Clinica Chimica Acta, 2006, 364(1-2):159-166.
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