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            技術(shù)文章

            Edu染色

            閱讀:1514          發(fā)布時(shí)間:2023-1-11

            服務(wù)介紹:

                 EdU(5-Ethynyl-2’- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物,能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子中,通過(guò)基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性,適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面。


            實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示:


            111.png


            實(shí)驗(yàn)流程:

                1.每孔加入2 mg/mLglycine,脫色搖床孵育5分鐘后,棄glycine溶液;

              注:作用是中和多聚甲醛,當(dāng)采用其他方式進(jìn)行細(xì)胞固定時(shí)可省略此步驟;

              2.每孔加入100 μL PBS,脫色搖床清洗5分鐘,棄PBS;

              3.每孔加入100μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床孵育10分鐘;PBS清洗1次,5分鐘。

              注:當(dāng)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行其他抗體染色,或由于某些細(xì)胞類(lèi)型對(duì)染料的吸附性較高,可能需要增強(qiáng)細(xì)胞膜通透性。

              4.每孔加入100 μL的1X Apollo®染色反應(yīng)液,避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后,棄染色反應(yīng)液;

              5.加入100 μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床清洗2~3次,每次10分鐘,棄滲透劑;

              6.(加強(qiáng))每孔每次加入100 μL甲醇清洗1~2次,每次5分鐘;PBS清洗1次,每次5分鐘。

              注:由于某些細(xì)胞對(duì)染料的吸附性較高,需采用加強(qiáng)方式洗脫以降低染料背景。

              染DAPI,封片,鏡檢。


            樣本運(yùn)輸要求:   

                 1.組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運(yùn)輸送樣。

              2.石蠟切片常溫保存運(yùn)輸

              3.冰凍切片-20℃保存運(yùn)輸

              4.細(xì)胞爬片固定液浸泡,4℃保存運(yùn)輸




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