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動物源性食品中的敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷樣品前處理方法
敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷均屬于有機磷農(nóng)藥，作為一種殺蟲劑，有機磷農(nóng)藥具有廣譜、高效、低毒、使用方便等特點，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、水產(chǎn)、林業(yè)等方面的防蟲或殺蟲工作。有機磷農(nóng)藥的廣泛使用，在給人們增加利益的同時也給環(huán)境造成了嚴(yán)重的污染。大量食用含有敵百蟲等農(nóng)藥殘留的食物會導(dǎo)致機體正常生理功能的失調(diào)，引起病理改變和毒性危害。因此，為保障動物源性食品的安全，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國家市場監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留*》中明確規(guī)定了敵百蟲和敵敵畏在牛和豬靶組織中的殘留*。
本文闡述了如何將敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點，依據(jù)國標(biāo)GB 23200.94-2016，為檢測人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。
檢測項目：敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷
應(yīng)用范圍：畜、禽分割肉、鹽漬腸衣和蜂蜜
液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
方法原理：試樣中的敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷用二氯甲烷或乙酸乙酯提取，提取液經(jīng)濃縮、脫脂后，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)峰面積法定量，子離子豐度比定性。
前處理儀器：
分析天平（感量0.01 g 和0.0001 g）；超聲波清洗器；旋渦混勻器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；離心機（5000 r/min）；均質(zhì)器；0.45 μm微孔濾膜。
檢測儀器：UHPLC-MS/MS+ESI源
試樣的制備與保存
1. 分割肉
取樣品中有代表性的約500 g，用組織搗碎機搗碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。
2. 腸衣
取有代表性樣品約100 g，用剪刀剪碎至2 毫米以下，裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。
3. 蜂蜜
取有代表性樣品約500 g，攪拌均勻后裝入潔凈容器內(nèi)密封并做好標(biāo)識。
試樣保存與制樣要求：分割肉、腸衣、蜂蜜等試樣于零下18 ℃ 以下冷凍保存。在制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。
前處理方法
1.分割肉
準(zhǔn)確稱取5 g均勻試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入5 g無水硫酸鈉混勻，再加入15 mL二氯甲烷，用均質(zhì)器（10000 r/min）均質(zhì)2 min，4000 r/min離心3 min，將有機相轉(zhuǎn)移至100 mL梨形蒸餾瓶中，殘渣再用2×10 mL二氯甲烷均質(zhì)提取兩次。離心合并有機相，于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2 mL，將樣液轉(zhuǎn)移至5 mL刻度試管中，并用少量二氯甲烷洗滌梨形蒸餾瓶，合并洗滌液到刻度試管中，室溫通氮濃縮至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解殘渣，加入2 mL環(huán)己烷旋渦混勻2 min后，2500 r/min離心3 min，將下層乙腈相過0.45 μm微孔濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。
2.腸衣
準(zhǔn)確稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入2 g無水硫酸鈉混勻，再加入15 mL二氯甲烷，蓋上蓋混勻，置于超聲波清洗器中超聲30 min，冷卻后將有機相過濾轉(zhuǎn)移至100 mL梨形蒸餾瓶中，殘渣再用2×10 mL二氯甲烷混勻超聲提取兩次，離心合并有機相，于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至2 mL，將樣液轉(zhuǎn)移至5 mL刻度試管中，并用少量二氯甲烷洗滌梨形蒸餾瓶，合并洗滌液到刻度試管中，室溫通氮濃縮至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解殘渣，加入2 mL環(huán)己烷旋渦混勻2 min后，2500 r/min離心3 min，將下層乙腈相過0.45 μm微孔濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。
3.蜂蜜
稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入10 mL水和25 mL乙酸乙酯，于旋渦混合器上混勻1 min，以3000 r/min離心5 min，將上層乙酸乙酯提取液收集于濃縮瓶中，殘渣再加入20 mL乙酸乙酯，重復(fù)上述操作，合并乙酸乙酯提取溶液。在50 ℃ 以下減壓濃縮至約3 mL后轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中，用5 mL乙酸乙酯分兩次洗滌濃縮瓶，合并洗滌液于離心管中，用氮氣吹干。加1.0 mL乙腈溶解殘渣，并過0.45 μm微孔濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。
國標(biāo)解讀&
注意事項
1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇配成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，在0 ℃～4 ℃冷藏避光保存，可使用3個月。
2.本方法中肉類和腸衣的提取凈化方式為：二氯甲烷提取三次，無水硫酸鈉除水，環(huán)己烷除脂；蜂蜜的的提取凈化方式為：水溶解后，乙酸乙酯提取兩次。三種基質(zhì)均相當(dāng)于5 g試料上機檢測。
3.根據(jù)基質(zhì)中含水量的多少，調(diào)整無水硫酸鈉的用量。
4.本方法采用多次提取的方式提高目標(biāo)化合物的回收率。
5.本方法使用基質(zhì)曲線進行定量，還可以使用三種化合物相對應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行回收率的校正。
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參考文獻
GB 23200.94-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物源性食品中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
圖1 分割肉中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖
圖2 腸衣中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖
圖3 蜂蜜中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖
表1 敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷信息表
文章來源：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心