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　　穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系（穩(wěn)定表達細胞株）指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩(wěn)定表達該基因。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株包括多克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株和單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經(jīng)細胞克隆挑選得到的，由一個細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統(tǒng)一，傳代過程中細胞的基因表達保持穩(wěn)定。
 

　　

　　篩選穩(wěn)定細胞株的兩種方法：

　　

　　1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系

　　

　　對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達，如果轉(zhuǎn)染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

　　

　　另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。

　　

　　2、病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株

　　

　　病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。

　　

　　穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株服務(wù)流程：

　　

　　1、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上，如需病毒轉(zhuǎn)染，則包裝病毒。

　　

　　2、篩選濃度測定：以10-14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。

　　

　　3、細胞接種：轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細胞應(yīng)達到60%-80%覆蓋。

　　

　　4、細胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體（或包裝好的病毒）轉(zhuǎn)染目的細胞。

　　

　　5、抗生素篩選。

　　

　　6、鑒定篩選結(jié)果。