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Jurkat 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定介紹

這是Jurkat-FHCRC細(xì)胞株(Jurkat細(xì)胞株的衍生)的一個(gè)克隆。 Jurkat細(xì)胞株來(lái)源于一個(gè)14歲男孩的外周血。 經(jīng)佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體(兩種類型的誘導(dǎo)都需要)誘導(dǎo)后可產(chǎn)生大量IL-2。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：T淋巴細(xì)胞；急性T細(xì)胞白血病

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞,懸浮生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

Jurkat 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后di一次傳代建議1：2傳代 。                      

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦：iCell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%； GlutaMAX （Gibco，35050061），1%；雙抗，1%。

參考傳代周期：不超過(guò)300萬(wàn)細(xì)胞/ mL，建議將活細(xì)胞密度控制在10萬(wàn)-100萬(wàn)/ mL之間

參考傳代密度：10萬(wàn)活細(xì)胞/ mL,參考換液頻率：2-3天。

2） 注意

a）該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)以及客戶的反饋，傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。同時(shí)，您在收到細(xì)胞后，請(qǐng)不要通過(guò)離心的方式收集細(xì)胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。

b）改細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口*優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。

c）該細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)，傳代時(shí)請(qǐng)注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）補(bǔ)加到6ml。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 收到細(xì)胞后*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。換液可通過(guò)添加幾毫升新鮮培養(yǎng)基或離心之后去上清液，添加新培養(yǎng)基重懸培養(yǎng)。

2） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細(xì)胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一、原代細(xì)胞服務(wù)
       各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源；
       多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源；
       原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等；
       原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)；

二、細(xì)胞株/系服務(wù)
       細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)；
       細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo)；
       細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等；

三、iPS細(xì)胞
       iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層在）；
       iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存；
       iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)；
       新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估；

四、技術(shù)外包服務(wù)：各類細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、顯微鏡拍照服務(wù)等

五、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等