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PCR儀實(shí)驗(yàn)過程碰到這些問題，應(yīng)該怎么辦
基因擴(kuò)增儀主要用于科研及臨床的基因擴(kuò)增、定性PCR基因擴(kuò)增、熒光/酶免終點(diǎn)定量DNA基因擴(kuò)增、基因芯片等其他基因分析應(yīng)用的基因擴(kuò)增等。
光學(xué)檢測系統(tǒng)：
1、光源：五個(gè)LED，各LED激發(fā)波長不同，保證每個(gè)通道的熒光素由優(yōu)質(zhì)的激發(fā)光激發(fā)
2、探測器：CCD，確保整板同時(shí)檢測，數(shù)據(jù)間可比性強(qiáng)
3、激發(fā)波長范圍：475nm-640nm
4、發(fā)射波長范圍：520nm-740nm
5、五個(gè)檢測通道：可同時(shí)能做四色檢測
6、線性范圍：11個(gè)數(shù)量級(jí)
7、靈敏度：可檢測到單拷貝
PCR儀部分：
1、半導(dǎo)體模塊加熱制冷
2、樣品容量：96孔
3、升溫速率：>5℃/秒，降溫速率>4.5℃/秒
4、溫度精度：+/- 0.25℃
5、溫度均一性：溫度均一性：≤±0.3℃
6、溫控范圍：4℃-99.9℃
7、熔解曲線檢測時(shí)，升降溫速率可到0.01℃/sec可調(diào)
8、熱蓋溫度：30℃-110℃可調(diào)
擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒有條帶或條帶很淺：
常見的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系，與反應(yīng)起始時(shí)RNA的總量及純度有關(guān)，建議在試驗(yàn)中加入對照RNA。
第一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10，建議用Oligo(dT)或隨機(jī)引物代替基因特異性引物(GSP)用于第一鏈合成。由于RNA模板存在二級(jí)結(jié)構(gòu)，如環(huán)狀結(jié)果，有可能導(dǎo)致GSP無法與模板退火；或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無法從此引物進(jìn)行有效延伸。
目的mRNA中含有強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn)，可以試用以下方法解決：
a.將第一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。
b.使用隨機(jī)六聚體代替Oligo(dT)進(jìn)行第一鏈反應(yīng)。