毛細(xì)管電泳系統(tǒng)主要構(gòu)造以及性能要求
毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)包括 進(jìn)樣系統(tǒng)、兩個(gè)緩沖液槽、高壓電源、檢測(cè)器、控制系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
毛細(xì)管電泳儀的主要部件和其性能要求如下。
(1)毛細(xì)管用彈性石英毛細(xì)管,內(nèi)徑50μm和75μm兩種使用較多(毛細(xì)管電色譜有時(shí)用內(nèi)徑再大些的毛細(xì)管)。細(xì)內(nèi)徑分離效果好,且焦耳熱小,允許施加較高電壓,但若采用柱上檢測(cè)因光程較短檢測(cè)限比較粗內(nèi)徑管要差。毛細(xì)管長(zhǎng)度稱為總長(zhǎng)度,根據(jù)分離度的要求,可選用20~100cm長(zhǎng)度,進(jìn)樣端至檢測(cè)器間的長(zhǎng)度稱為有效長(zhǎng)度。毛細(xì)管常盤放在管架上控制在一定溫度下操作,以控制焦耳熱,操作緩沖液的黏度和電導(dǎo)度,對(duì)測(cè)定的重復(fù)性很重要。
(2)直流高壓電源采用0~30kV(或相近)可調(diào)節(jié)直流電源,可供應(yīng)約300μA電流,具有穩(wěn)壓和穩(wěn)流兩種方式可供選擇。
(3)電極和電極槽兩個(gè)電極槽里放入操作緩沖液,分別插入毛細(xì)管的進(jìn)口端與出口端以及鉑電極,鉑電極接至直流高壓電源,正負(fù)極可切換。多種型號(hào)的儀器將樣品瓶同時(shí)用做電極槽。
(4)沖洗進(jìn)樣系統(tǒng)每次進(jìn)樣之前毛細(xì)管要用不同溶液沖洗,選用自動(dòng)沖洗進(jìn)樣儀器較為方便。進(jìn)樣方法有壓力(加壓)進(jìn)樣、負(fù)壓(減壓)進(jìn)樣、虹吸進(jìn)樣和電動(dòng)(電遷移)進(jìn)樣等。進(jìn)樣時(shí)通過控制壓力或電壓及時(shí)間來(lái)控制進(jìn)樣量。
(5)檢測(cè)系統(tǒng)紫外-可見光分光檢測(cè)、激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)、電化學(xué)檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)均可用作毛細(xì)管電泳的檢測(cè)器。其中以紫外-可見光分光光度檢測(cè)器應(yīng)用廣,包括單波長(zhǎng)、程序波長(zhǎng)和二極管陣列檢測(cè)器。將毛細(xì)管接近出口端的外層聚合物剝?nèi)ゼs2mm一段,使石英管壁裸露,毛細(xì)管兩側(cè)各放置一個(gè)石英聚光球,使光源聚焦在毛細(xì)管上,透過毛細(xì)管到達(dá)光電池。對(duì)無(wú)光吸收(或熒光)的溶質(zhì)的檢測(cè),還可采用間接測(cè)定法,即在操作緩沖液中加入對(duì)光有吸收(或熒光)的添加劑,在溶質(zhì)到達(dá)檢測(cè)窗口時(shí)出現(xiàn)反方向的峰值。
(6)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)與一般色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)基本相同。
毛細(xì)管電泳儀的主要部件和其性能要求如下。
(1)毛細(xì)管用彈性石英毛細(xì)管,內(nèi)徑50μm和75μm兩種使用較多(毛細(xì)管電色譜有時(shí)用內(nèi)徑再大些的毛細(xì)管)。細(xì)內(nèi)徑分離效果好,且焦耳熱小,允許施加較高電壓,但若采用柱上檢測(cè)因光程較短檢測(cè)限比較粗內(nèi)徑管要差。毛細(xì)管長(zhǎng)度稱為總長(zhǎng)度,根據(jù)分離度的要求,可選用20~100cm長(zhǎng)度,進(jìn)樣端至檢測(cè)器間的長(zhǎng)度稱為有效長(zhǎng)度。毛細(xì)管常盤放在管架上控制在一定溫度下操作,以控制焦耳熱,操作緩沖液的黏度和電導(dǎo)度,對(duì)測(cè)定的重復(fù)性很重要。
(2)直流高壓電源采用0~30kV(或相近)可調(diào)節(jié)直流電源,可供應(yīng)約300μA電流,具有穩(wěn)壓和穩(wěn)流兩種方式可供選擇。
(3)電極和電極槽兩個(gè)電極槽里放入操作緩沖液,分別插入毛細(xì)管的進(jìn)口端與出口端以及鉑電極,鉑電極接至直流高壓電源,正負(fù)極可切換。多種型號(hào)的儀器將樣品瓶同時(shí)用做電極槽。
(4)沖洗進(jìn)樣系統(tǒng)每次進(jìn)樣之前毛細(xì)管要用不同溶液沖洗,選用自動(dòng)沖洗進(jìn)樣儀器較為方便。進(jìn)樣方法有壓力(加壓)進(jìn)樣、負(fù)壓(減壓)進(jìn)樣、虹吸進(jìn)樣和電動(dòng)(電遷移)進(jìn)樣等。進(jìn)樣時(shí)通過控制壓力或電壓及時(shí)間來(lái)控制進(jìn)樣量。
(5)檢測(cè)系統(tǒng)紫外-可見光分光檢測(cè)、激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)、電化學(xué)檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)均可用作毛細(xì)管電泳的檢測(cè)器。其中以紫外-可見光分光光度檢測(cè)器應(yīng)用廣,包括單波長(zhǎng)、程序波長(zhǎng)和二極管陣列檢測(cè)器。將毛細(xì)管接近出口端的外層聚合物剝?nèi)ゼs2mm一段,使石英管壁裸露,毛細(xì)管兩側(cè)各放置一個(gè)石英聚光球,使光源聚焦在毛細(xì)管上,透過毛細(xì)管到達(dá)光電池。對(duì)無(wú)光吸收(或熒光)的溶質(zhì)的檢測(cè),還可采用間接測(cè)定法,即在操作緩沖液中加入對(duì)光有吸收(或熒光)的添加劑,在溶質(zhì)到達(dá)檢測(cè)窗口時(shí)出現(xiàn)反方向的峰值。
(6)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)與一般色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)基本相同。