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            食品安全檢測試劑盒解決方案

            時(shí)間:2020/7/16閱讀:251
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            Elisa生物檢測是一種敏感度高,同時(shí)特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)檢測方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

            目前市面上的Elisa試劑盒檢測原理主要有以下四種:直接法,間接法,夾心法,競爭法。

              四種Elisa檢測方法由于其檢測原理各有優(yōu)劣:

             

            優(yōu)點(diǎn)

            缺點(diǎn)

            直接法

            1.操作簡便
            2.消除了二抗交叉反應(yīng)

            1.一抗由于添加標(biāo)簽免疫活性降低
            2.標(biāo)記一抗耗時(shí)且昂貴
            3.沒有產(chǎn)生信號放大

            間接法

            1. 一抗的*大免疫反應(yīng)性得以保留
            2. 高靈敏度,信號放大

            1. 二級抗體可能發(fā)生交叉反應(yīng),產(chǎn)生非特異性信號
            2. 需要額外的孵育步驟

            夾心法

            1.特異性,靈敏度高
            2.適合復(fù)雜的樣本

            1.檢測時(shí)間,反應(yīng)時(shí)間增加
            2.步驟繁瑣

            競爭法

            1. 通過觀察預(yù)期信號輸出中的干擾來測量樣本中抗原(或抗體)的濃度。
            2. 常用于分析物較小,不能同時(shí)跟兩種不同的抗體結(jié)合。

            1.計(jì)算不太直觀
            2.總體敏感性和特異性較低。

            通常我們在選擇所需要的Elisa試劑盒時(shí)主要會從以下幾個(gè)方面進(jìn)行選擇:

            Elisa試劑盒選擇原則:

            指標(biāo)

            選項(xiàng)

            樣本類型

            人,小鼠,大鼠

            檢測指標(biāo)的類別

            ·多表位的大蛋白:夾心ELISA
            ·小分子:競爭ELISA

            檢測需求

            定性或定量

            靈敏度

            低濃度的物質(zhì)需選擇高靈敏度檢測方式

            樣本體積

            珍貴的樣本用少量的體積

            回收率和線性

            ·靈敏度
            ·動(dòng)態(tài)范圍
            ·標(biāo)準(zhǔn)曲線

            檢測系統(tǒng)

            比色法,熒光法,發(fā)光法

            其他優(yōu)勢

            協(xié)議簡單,操作方便,實(shí)驗(yàn)時(shí)間短

            Elisa試劑盒質(zhì)量到底怎樣?檢測結(jié)果的可信度高不高?

            Elisa試劑盒評價(jià)標(biāo)準(zhǔn):

                  ① 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,應(yīng)大于等于0.9900。

                  ② 靈敏度:反應(yīng)試劑盒的*低檢測濃度

                  ③ 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

                  ④ 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)

                  ⑤ 回收率:判斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和特異性

            Elisa試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線:

            標(biāo)曲R值是幾個(gè)9才合格?

            實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按檢測標(biāo)準(zhǔn)(方法)的要求使用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。所用標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標(biāo)準(zhǔn)(方法)如無具體的要求,至少使用5個(gè)標(biāo)樣(除空白外)建立線性標(biāo)準(zhǔn)曲線,每個(gè)點(diǎn)重復(fù)測定1-3次,對于篩選方法,線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.98,對于確證方法,相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。

            其實(shí),大于0.99是判斷是否為線性相關(guān)的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn),實(shí)際應(yīng)用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監(jiān)測結(jié)果只用接近*高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準(zhǔn)確,如果線性大于0.999的話,在整個(gè)線性范圍內(nèi)都會有一個(gè)比較滿意的結(jié)果。

            如果檢測的線性不好,可以減少標(biāo)準(zhǔn)的覆蓋范圍,將標(biāo)準(zhǔn)的濃度調(diào)整到待測樣品濃度附近,這樣結(jié)果也是非常準(zhǔn)確的。例如,樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,但線性非常不理想,這時(shí)可以將標(biāo)準(zhǔn)范圍調(diào)整到15~25ppb之間,作五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

            可以檢測檢測各類食品,飼料,組織及生物液體中真菌毒素、抗生素、食品添加劑以及其他細(xì)菌蛋白的ELISA試劑盒:

            1.抗生素類:氨芐青霉素,E4350,樣本:血清,尿液,牛奶,組織

            檢測食品中抗生素的殘留

            樣本類型:組織、血清、牛奶、雞蛋和其他生物樣本

            真菌毒素是真菌產(chǎn)生的低分子量次級代謝產(chǎn)物2.真菌毒素:總黃丨曲素,E4747,樣本:酒、醬油、醋、谷物、花生、
            配方飼料、食用油

            樣品類型:玉米、谷物、花生、大米、大豆等。

            食品受到生物和環(huán)境污染物的污染發(fā)生在生產(chǎn)和加工的幾個(gè)階段3.食品添加劑: 沙丁胺醇,K4209,樣本:豬尿、組織、飼料

            樣品類型:牛奶、肉類、玉米、谷物、花生、大米、大豆,等。

            表達(dá)蛋白經(jīng)過幾個(gè)純化步驟后,宿主細(xì)胞蛋白仍然可以以較高濃度存在,甚至?xí)c原料藥一起純化和濃縮;樣品類型:細(xì)胞裂解液、其他生物液

            4.宿主細(xì)胞蛋白:CHO 宿主細(xì)胞蛋白,E4537,樣本:細(xì)胞裂解液,其他生物液體

            5.其他毒素:雙酚A(BPA),E4722,樣本:細(xì)胞裂解液,其他生物液體

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