m6A 202003：檢測RNA和DNA的N6-甲基腺苷（m6A）修飾

一、背景資料

m6A(N6-甲基腺苷)是一種轉(zhuǎn)錄后的RNA修飾，在所有種屬中都有發(fā)現(xiàn)，例如在脊椎動物的snRNAsU2、U4、U6中，在病毒和真核生物的mRNAs中，以及在大腸桿菌的16SrRNA中。研究發(fā)現(xiàn)，mRNA主要是在終止密碼子和長的內(nèi)部外顯子處進行m6A修飾，這在小鼠和人類之間是保守的。所謂的RNA甲基組可能在基因表達的調(diào)控中起著重要作用。在大腸桿菌中，Dam甲基酶在DNA水平上引入5'-GATC-3'座的m6A修飾。這使得細胞在錯配修復過程中能夠區(qū)分親本鏈和子鏈。

二、應(yīng)用類型

WB: 1:1000-1:10000DotBlot ：參考發(fā)表文章

IP: 參考發(fā)表文章ICC: 1:200

IHC: 參考發(fā)表文章IHC-P/FFPE: 1:100

ELISA: sandwich-ELISA

三、發(fā)表文章（超200篇）

部分發(fā)表文章展示：

1.WB（+3）

HIV-1envelopeproteinsup-regulateN6-methyladenosinelevelsofcellularRNAindependentlyofviralreplication.

TirumuruN,WuL.TheJournalofbiologicalchemistry(2019):.202003WB,DOTBLOT;testedspecies:human

2.Dolt Blot（+63）

N6-methyladenineDNAModificationinGlioblastoma.XieQ,WuTP,GimpleRC,LiZ,PragerBC,WuQ,YuY,WangP,WangY,GorkinDU,ZhangC,etal.

Cell (2018):. 202003DOTBLOT,IP,ICC,IHC-P;testedspecies:humanN6-methyladenineinDNAantagonizesSATB1inearlydevelopment.LiZ,ZhaoS,NelakantiRV,LinK,WuTP,AldermanMH,GuoC,WangP,ZhangM,MinW,JiangZ,etal.

Nature (2020):. 202003DOTBLOT,IP,ICC;testedspecies:mouseIdentificationofaDNAN6-AdenineMethyltransferaseComplexandItsImpactonChromatinOrganization.BehLY,DebelouchinaGT,ClayDM,ThompsonRE,LindbladKA,HuttonER,BrachtJR,SebraRP,MuirTW,LandweberLF

Cell (2019):. 202003DOTBLOT

3.IP（+143）

N6-methyladenineinDNAantagonizesSATB1inearlydevelopment.LiZ,ZhaoS,NelakantiRV,LinK,WuTP,AldermanMH,GuoC,WangP,ZhangM,MinW,JiangZ,etal.

Nature (2020):. 202003IP;testedspecies:mouseDecipheringthe"m6ACode"viaAntibody-IndependentQuantitativeProfiling.Garcia-CamposMA,EdelheitS,TothU,SafraM,ShacharR,ViukovS,WinklerR,NirR,LasmanL,BrandisA,HannaJH,etal.

Cell (2019):. 202003IP;testedspecies:human,mouseR-2HGExhibitsAnti-tumorActivitybyTargetingFTO/m6A/MYC/CEBPASignaling.SuR,DongL,LiC,NachtergaeleS,WunderlichM,QingY,DengX,WangY,WengX,HuC,YuM,etal.

Cell (2018)1721-2:90-105.e23. 202003IP;testedspecies:human

FAQ:應(yīng)該如何保存SYSY抗體

【1】運輸條件

所有抗體和對照蛋白/肽以凍干粉狀態(tài)（真空冷凍干燥）運輸，室溫下可以在數(shù)周內(nèi)保持穩(wěn)定和活性。

【2】如何重組（Reconstitution，溶解）抗體

1.所有抗體均由PBS凍干。用PBS溶解抗體凍干粉，請參照數(shù)據(jù)手冊定量添加去離子水。大容量溶解時，先添加去離子水，然后適量的PBS和蛋白穩(wěn)定劑（例如BSA）至2%的終濃度。添加蛋白穩(wěn)定劑時請注意，部分抗體已經(jīng)含有血清白蛋白。

2.制作重懸溶液時請小心打開蓋子。添加去離子水后，輕微晃動溶液。為使液體聚集在樣品瓶底部，可以使用離心機離心。操作離心機時，可以在50ml離心管中樣品瓶下面鋪墊廢紙，以方便離心后取出。

3.為抑制細菌生長，可以添加少量的疊氮化物或硫柳汞作為防腐劑。該操作特別適用于分量包裝在4℃條件下保存。

4.熒光標記抗體重懸后，添加1：1比例（體積）的甘油至50%濃度，從而降低冰點并在-20℃保持液體狀態(tài)。

5.可以向不帶標記的一抗添加甘油，以避免凍融循環(huán)。

6.按照說明保存重懸溶液。

【3】重懸（Reconstitution）后的長期儲存

1.不要使用帶有自動除霜功能的冷凍柜（無霜冰柜），以避免此類冰柜的除霜循環(huán)（反復凍融，以減少霜的形成）?？贵w樣品瓶應(yīng)放置在冷凍柜中溫度變化小的位置，例如冷凍柜的內(nèi)測。

2.分裝抗體并保存在冷凍狀態(tài)下（-20℃至-80℃）。分裝量每份10ul，盡可能使用小的儲存容器。分裝量越小，樣品濃度則越容易受到蒸發(fā)以及容器表面對抗體吸附的影響。容器表面的吸附作用會顯著降低蛋白活性。

3.向樣品中添加甘油至50%的濃度可以有效降低冰點，在-20℃的條件下也能夠保持液體狀態(tài)，從而有效地避免反復凍融。

【4】不同產(chǎn)品類型的針對性保存建議

1.對照蛋白/肽:儲存溫度為-20℃至-80℃

2.單克隆抗體：

（1）腹水液和雜交瘤上清液:應(yīng)保存在-20℃至-80℃條件下。不推薦在4℃環(huán)境下長期存儲，與血清不同，腹水液可能含有的蛋白酶會降解抗體。

（2）純化IgG:應(yīng)保存在-20℃至-80℃條件下。添加蛋白穩(wěn)定劑，例如BSA，可以增強抗體的長期穩(wěn)定性。請查閱數(shù)據(jù)手冊以獲悉產(chǎn)品是否已經(jīng)添加蛋白穩(wěn)定劑。

3.多克隆抗體：

（1）抗血清: 已添加抗菌劑，可以保存在4℃的條件下，建議保存在-20℃至-80℃。

（2）親和純化抗體：穩(wěn)定性稍弱于抗血清。建議保存在-20℃至-80℃條件下。添加蛋白穩(wěn)定劑，例如BSA，可以增強抗體的長期穩(wěn)定性。請查閱數(shù)據(jù)手冊以獲悉產(chǎn)品是否已經(jīng)添加蛋白穩(wěn)定劑。

4.帶熒光標記抗體:與甘油以1：1比例（體積）混合，在-20℃至-80℃條件下以液體狀態(tài)儲存，避免光照。

文章來源：艾美捷科技