近年來(lái)，AAT熒光探針領(lǐng)域陸續(xù)出現(xiàn)了很多優(yōu)質(zhì)的鈣離子探針，這些為實(shí)現(xiàn)高通量監(jiān)測(cè)鈣濃度，篩選GPCR和鈣離子通道藥物篩選提供了有力的工具。下面一起來(lái)看看幾個(gè)關(guān)于鈣離子探針的常見(jiàn)問(wèn)題吧~希望能給大家?guī)?lái)一些幫助！

一、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）鈣離子濃度檢測(cè)熒光探針

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是一個(gè)復(fù)雜的、高度動(dòng)態(tài)的細(xì)胞內(nèi)三維膜系統(tǒng)，在大多數(shù)真核細(xì)胞中起著動(dòng)態(tài)鈣庫(kù)的作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+緩沖液的特殊排列，以對(duì)Ca2+的低親和力為特征，與SERCA泵活性相結(jié)合，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+（[Ca2+]L）保持恒定∼0.1–0.8 mM（細(xì)胞鈣38:303–310，2005），從而產(chǎn)生針對(duì)細(xì)胞溶膠的陡峭電化學(xué)梯度。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+通道的激活導(dǎo)致Ca2+釋放，這有助于[Ca2+]i升高，而SERCA依賴(lài)的Ca2+攝取有助于終止胞漿Ca2+信號(hào)。

此外，連續(xù)的管腔空間可作為游離Ca2+離子（“Ca2+通道”）的行進(jìn)路線，從而繞過(guò)胞漿Ca2+緩沖液，防止線粒體Ca2+攝取或Ca2+在質(zhì)膜上丟失。

此外，[Ca2+]L的變化調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留的伴侶，負(fù)責(zé)翻譯后的蛋白質(zhì)處理。因此，[Ca2+]L整合了各種信號(hào)事件，并在與ER-Ca2+釋放/攝取相關(guān)的快速信號(hào)和主要依賴(lài)于蛋白質(zhì)合成調(diào)節(jié)的持久適應(yīng)性反應(yīng)之間建立了聯(lián)系。

那么，關(guān)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子檢測(cè)，Cal-520N（Cat# 21146）, Calbryte 520L（Cat# 20640）, Fluo-5N（Cat# 20566）和Mag-fluo4（Cat# 20401)都是可以的。

二、檢測(cè)細(xì)胞中鈣離子時(shí)加入丙磺舒（probenecid）的作用是什么？文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)丙磺舒（probenecid）可能會(huì)干擾鈣離子通道，比如干擾環(huán)核苷酸門(mén)控通道，有沒(méi)有可以不用丙磺舒的鈣離子探針？

丙磺舒（probenecid），是一種陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑，用來(lái)降低探針進(jìn)入胞內(nèi)后被排除的幾率，以提高胞內(nèi)信號(hào)。常見(jiàn)的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要加丙磺舒，否則信號(hào)會(huì)很低?？梢赃x擇Calbryte系列，該系列無(wú)需丙磺舒（probenecid）仍會(huì)有很好的信號(hào)。

三、熒光探針的AM、鹽形式、Dextran葡聚糖形式有什么區(qū)別？

AM酯形式：AM酯形式是一種可以透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞的，不需要其他輔助工具；

鹽形式：鹽形式的Fluo-8不能自行穿過(guò)細(xì)胞膜，需要輔助進(jìn)入細(xì)胞，如微量注射等；

Dextran葡聚糖形式：若檢測(cè)孵育時(shí)間久容易發(fā)生區(qū)室化，比如鉆進(jìn)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等亞器官內(nèi)，Dextranzui大的優(yōu)勢(shì)就是降低了區(qū)室化作用，但是需要顯微注射或其他方式才能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。

四、樣本中鈣離子定量檢測(cè)試劑盒

人體血液里鈣離子的濃度大約在19 -10.5 mg/dL范圍內(nèi)，血液里鈣離子濃度過(guò)低或者過(guò)高可引起低鈣血癥和高鈣血癥。Amplite 熒光法鈣離子定量試劑盒（Cat#36360）可用于定量體液的鈣離子濃度，可使用96孔或者384孔板經(jīng)酶標(biāo)儀讀取數(shù)值， 不需進(jìn)行樣本分離直接檢測(cè)，30min可完成，zui低檢測(cè)到0.03mM的鈣離子。

五、用于植物細(xì)胞（擬南芥原生質(zhì)體）的鈣離子探針

常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都適用于植物細(xì)胞，Fluo-4zui常用，若要獲得更好的信噪比，其升級(jí)版本 Calbryte 520 AM更合適。

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