MycoLightTM比率細(xì)菌膜電位試劑盒*紅色/綠色熒光*產(chǎn)品，操作簡(jiǎn)單，快速，能幫助科研工作者更好的進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)。

艾美捷 MycoLightTM比率細(xì)菌膜電位試劑盒程序如下：

1.在任何合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌。健康細(xì)菌的 結(jié)果來(lái)自對(duì)數(shù)期培養(yǎng)。在PBS（成分C）或同等無(wú)菌緩沖液中，將細(xì)菌培養(yǎng)物稀釋至每毫升約106個(gè)細(xì)胞。細(xì)菌可直接從培養(yǎng)基中稀釋，無(wú)需清洗。準(zhǔn)備足夠的懸浮液，每次試驗(yàn)提供500 mL。

2.將等分的500µl細(xì)菌懸浮液放入流式細(xì)胞儀管中，用于進(jìn)行每次染色實(shí)驗(yàn)。為去J化對(duì)照品和未染色對(duì)照品準(zhǔn)備兩個(gè)附加試管。

3.向去J化對(duì)照樣品中添加10µl 500µM CCCP（成分B）并混合。

4.添加5µl霉菌染色劑™ 將綠色（100X）（成分A）注入每個(gè)流式細(xì)胞儀試管并混合（不要向未染色的對(duì)照樣品添加染色劑）。在室溫下培養(yǎng)樣品30分鐘。染色樣品可在5分鐘后進(jìn)行分析，但信號(hào)強(qiáng)度持續(xù)增加，直到約30分鐘。

5.染色細(xì)菌可在配備488 nm激光的流式細(xì)胞儀中進(jìn)行分析。熒光在綠色（熒光素濾光片）和紅色（德克薩斯州紅色濾光片）通道中收集。前向散射、側(cè)向散射和熒光應(yīng)通過(guò)對(duì)數(shù)信號(hào)放大進(jìn)行收集。

6.儀器調(diào)整對(duì)于檢測(cè)相對(duì)較小的顆粒（如細(xì)菌）尤其重要。使用未染色的對(duì)照樣品定位正向和側(cè)向散射通道中的細(xì)菌種群。使用側(cè)散射作為設(shè)置采集觸發(fā)器的參數(shù)。

7.如上所述調(diào)整流式細(xì)胞儀后，應(yīng)用去J化對(duì)照樣品。使用正向散射和側(cè)向散射對(duì)細(xì)菌進(jìn)行選通，并調(diào)整熒光光電倍增管電壓，使綠色和紅色MFI值大致相等。不要設(shè)定補(bǔ)償。

8.紅色和綠色熒光強(qiáng)度的相對(duì)數(shù)量會(huì)隨著細(xì)胞大小和聚集而變化，而紅色和綠色熒光強(qiáng)度的比率可以用作膜電位的大小無(wú)關(guān)的指示器。數(shù)據(jù)還可以通過(guò)使用前向散射和側(cè)向散射對(duì)細(xì)菌進(jìn)行選通來(lái)處理，并使用紅色和綠色熒光點(diǎn)圖分析選通種群，報(bào)告MFI值為線性值，而不是通道。

9.在比率直方圖上，在感興趣的峰值周圍設(shè)置標(biāo)記，并記錄平均比率值。對(duì)于紅色和綠色熒光的點(diǎn)圖，在感興趣的群體周圍設(shè)置區(qū)域，并記錄每個(gè)群體的紅色和綠色平均熒光強(qiáng)度（MFI）值。為了評(píng)估數(shù)據(jù)，將紅色總體MFI除以綠色總體MFI。

10.在流式細(xì)胞儀中，細(xì)菌僅根據(jù)其大小和染色能力進(jìn)行鑒定。 通過(guò)熒光顯微鏡檢查每個(gè)樣品，以確認(rèn)檢測(cè)到的顆粒確實(shí)是細(xì)菌。

AAT Bioquest Inc 致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括顯色、熒光和生物發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助 科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。艾美捷科技是AAT 的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的比率細(xì)菌膜電位試劑盒。