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            初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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            Annexin V——檢測(cè)細(xì)胞的靈敏指標(biāo)

            時(shí)間:2022/2/18閱讀:259
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            細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。

             

            AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kDCa依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。Annexin V作為一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,它通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V是檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。

             

            艾美捷/Annexin V 是一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,它通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合,是檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。

             

            艾美捷/Annexin V組成成分:

            11.png

             

            艾美捷/Annexin V建議的染色方案:

            1.在冷PBS中清洗細(xì)胞兩次

            2.在冷1X ApoScreen®中重新使用電池膜聯(lián)蛋白結(jié)合緩沖液(SB目錄號(hào)10045-01)濃度為1 x 106細(xì)胞/mL

            3.加100mL細(xì)胞懸液至5mL聚苯乙烯圓底管

            4.加10m共軛ApoScreen®Annexin V

            5.輕輕旋轉(zhuǎn)每根試管,在2-8°C溫度下培養(yǎng)15分鐘,并避光

            6.在不清洗的情況下,添加~380m冷1X ApoScreen®Annexin 結(jié)合緩沖液到每根管

            7.加10mApoScreen®L7-氨基放丨線丨菌素D7-AAD;SB分類(lèi)號(hào)10042-01)或ApoScreen®碘化丙啶(PI;SB類(lèi)別號(hào)。

             

            艾美捷/Annexin V儲(chǔ)存方式:

            1.純化的(UNLBApoScreen®Annexin V 0.1mg純化的重組蛋白形式從PBS中凍干。儲(chǔ)存材料在重構(gòu)前的-20°C溫度下。用1.0毫升的dH2O重新配制。將再造材料儲(chǔ)存在2-8°C的溫度下。

            2.熒光素(FITC)、生物素(BIOT)和菁5CY5ApoScreen®附錄V結(jié)合物在1.0毫升的溶液中作為100次試驗(yàn)提供ApoScreen®Annexin V 結(jié)合緩沖液。在2-8°C下儲(chǔ)存。

            3.R-藻紅蛋白(PE)和別藻藍(lán)蛋白(APCApoScreen®1.0毫升PBS/NaN3中,以100次試驗(yàn)的形式提供膜Annexin V結(jié)合物和穩(wěn)定劑。在2-8°C下儲(chǔ)存。不要冷凍!

            4.保護(hù)熒光色素結(jié)合物不受光照。如果按照指示儲(chǔ)存,試劑在標(biāo)簽上顯示的時(shí)間內(nèi)是穩(wěn)定的。


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