艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬檢測(cè)試劑盒 2.0：一種用于監(jiān)測(cè)活細(xì)胞自噬的更明亮、更耐光、無(wú)轉(zhuǎn)染的定量檢測(cè)方法。

CYTO-ID ®自噬檢測(cè)試劑盒 2.0 使用一種選擇性標(biāo)記積累的自噬泡的新型染料測(cè)量自噬泡并監(jiān)測(cè)溶酶體抑制的活細(xì)胞中的自噬通量。該染料已通過(guò)識(shí)別可滴定功能部分進(jìn)行了優(yōu)化，該部分允許對(duì)溶酶體進(jìn)行最小染色，同時(shí)在摻入前自噬體、自噬體和自噬溶酶體（自噬溶酶體）時(shí)表現(xiàn)出明亮的熒光。該測(cè)定提供了一種快速和定量的方法來(lái)監(jiān)測(cè)活細(xì)胞中的自噬，而無(wú)需細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬檢測(cè)試劑盒組分：

CYTO-ID ® Green Detection Reagent 2

Hoechst 33342 核染色

自噬誘導(dǎo)劑（雷帕霉素）

氯喹對(duì)照

10X 檢測(cè)緩沖液

艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)：

1.沒(méi)有轉(zhuǎn)染試驗(yàn)消除了轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證的需要

2.更亮、更耐光的染料可特異性染色自噬囊泡

3.溶酶體的可忽略不計(jì)的染色降低了其他染料的背景

4.快速量化天然異質(zhì)細(xì)胞群中的自噬

5.促進(jìn)自噬激活劑和抑制劑的高通量篩選

艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬檢測(cè)試劑盒作用機(jī)制：

該探針是一種陽(yáng)離子兩親示蹤劑 (CAT) 染料，它以與誘導(dǎo)磷脂沉積的藥物類(lèi)似的方式快速分配到細(xì)胞中。仔細(xì)選擇染料上的可滴定功能部分可防止其在溶酶體內(nèi)積聚，但可以標(biāo)記與自噬途徑相關(guān)的液泡。

艾美捷 Enzo CYTO-ID ®自噬檢測(cè)試劑盒化學(xué)性質(zhì)：

應(yīng)用：流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡、熒光檢測(cè)、HTS

質(zhì)量控制：顯微鏡檢查：當(dāng) CYTO-ID® Green 自噬檢測(cè)試劑 2 摻入細(xì)胞中時(shí)，通常會(huì)在細(xì)胞核周區(qū)域的球形空泡中、在整個(gè)細(xì)胞質(zhì)中分布的病灶中或在這兩個(gè)位置中觀察到這種熒光探針的積累，具體取決于根據(jù)正在研究的細(xì)胞類(lèi)型。與按照用戶(hù)手冊(cè)所述制備的自噬樣品相比，未誘導(dǎo)的細(xì)胞顯示出非常低的背景染色。

數(shù)量：對(duì)于 -0200 尺寸：

200 次流式細(xì)胞儀檢測(cè)、250 次顯微鏡檢測(cè)或 3 x 96 孔微孔板檢測(cè)。

-0050 尺寸：

50 次流式細(xì)胞儀檢測(cè)、60 次顯微鏡檢測(cè)或 1 x 96 孔微孔板檢測(cè)。

使用/穩(wěn)定性：通過(guò)適當(dāng)?shù)拇鎯?chǔ)，試劑盒組件自收到之日起可穩(wěn)定使用一年。

處理：避光。避免冷凍/解凍循環(huán)。

在藍(lán)冰上運(yùn)送

短期儲(chǔ)存：-20°C

長(zhǎng)期儲(chǔ)存：-80°C

圖：基于微孔板的 HepG2 細(xì)胞自噬分析。在 DMSO（對(duì)照）、0.5 µM 雷帕霉素 (Rap)、10 µM 氯喹 (CLQ) 或 0.5 µM Rap 和 10 µM CLQ 中培養(yǎng) 20 小時(shí)后，HepG2 細(xì)胞被 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2 染色。細(xì)胞也用 Hoechst 33342 染色以進(jìn)行細(xì)胞數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化。用 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2 測(cè)量，用雷帕霉素和氯喹處理的細(xì)胞自噬增加。