TNF-α ELISA試劑盒將用于檢測(cè)和量化內(nèi)源性TNF-α的蛋白質(zhì)水平。該測(cè)定可識(shí)別小鼠TNF-α。TNF-α特異性抗體已預(yù)先包被到微孔上。樣品中的TNF-α蛋白在孵育后被包被的抗體捕獲。經(jīng)過大量洗滌后，加入另一種針對(duì)TNF-α的生物素化特異性抗體以檢測(cè)捕獲的TNF-α蛋白。對(duì)于信號(hào)開發(fā)，加入鏈霉親和素-HRP，然后加入四甲基聯(lián)苯胺（TMB）試劑。含有硫酸的溶液用于停止顯色，并且在450nm處可測(cè)量與結(jié)合蛋白量成比例的顏色強(qiáng)度，校正波長(zhǎng)設(shè)置為630nm。

艾美捷小鼠TNF-α ELISA試劑盒#NDC-KSP-ZWL3G1-96基本參數(shù)：

應(yīng)用 酶聯(lián)免疫吸附法

描述 小鼠 TNF-α 酶聯(lián)免疫酶抑制劑試劑盒

類型 檢測(cè)與檢測(cè)

范圍 7.8-500 皮克/毫升

研究領(lǐng)域 細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)

樣品類型 血清，血漿

敏感性 1.0 皮克/毫升

規(guī)格 96t

物種反應(yīng)性 鼠

材料/試劑：

包衣抗體（包衣緩沖液中1-10μg/ml）

樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品

初級(jí)抗體（未標(biāo)記或生物素化）

酶標(biāo)記的第二抗體

基底

涂層緩沖液：0.15M碳酸鈉，0.35M碳酸氫鈉，pH 9.6

（碳酸鹽涂層緩沖液）

磷酸鹽緩沖鹽水（PBS），pH7.4

封閉緩沖液：PBS，1%BSA

洗滌溶液：PBS，0.05%Tween--20

稀釋緩沖液：PBS，0.05%Tween--20，0.1%牛血清白蛋白；PBS，0.1%牛血清白蛋白

停止解決方案；2%草酸

小鼠TNF-α ELISA試劑盒相關(guān)程序：

在測(cè)定之前，兩種抗體制劑都應(yīng)純化且不含白蛋白。這個(gè)須標(biāo)記檢測(cè)抗體。

1.捕獲抗體涂層

將約100μl的涂層抗體溶液加入到每個(gè)井。所使用的抗體的量將取決于個(gè)體測(cè)定，優(yōu)化緩沖液和涂層濃度（1-10μg/孔）。抽吸涂層溶液。

2.閉塞

微量滴定板上蛋白質(zhì)結(jié)合的剩余位點(diǎn)必須飽和通過與阻斷緩沖液孵育。用200μl封閉緩沖液填充孔。用粘性塑料覆蓋板，在室溫下孵育60-90分鐘溫度或在4°C下過夜。用洗滌液洗井四次。

3.樣品培養(yǎng)

將100μl稀釋后的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品加入孔中。全部的稀釋應(yīng)在稀釋緩沖液中進(jìn)行。用粘性塑料覆蓋板，并在37°C下孵育60-90分鐘。用清洗液將盤子清洗四次。

4.與第一抗體孵育

添加100μl一級(jí)抗體。添加量可在中確定初步實(shí)驗(yàn)。為了準(zhǔn)確定量，第一抗體應(yīng)該過量使用。所有稀釋均應(yīng)在稀釋緩沖液中進(jìn)行。

5.與第二抗體（或在生物素化的第一抗體）

添加100μl標(biāo)記的第二抗體。要添加的數(shù)量可以是在初步實(shí)驗(yàn)中確定。為了精確定量，標(biāo)記

應(yīng)過量使用第二抗體。所有稀釋均應(yīng)在稀釋緩沖液。用粘性塑料覆蓋板，在室溫下孵育60-90分鐘溫度或-20°C。用洗滌液洗滌四次。

6.底物培養(yǎng)

按照制造商的指示添加基材。經(jīng)過建議的培養(yǎng)時(shí)間后，將停止溶液添加到每個(gè)孔中?？梢栽贓LISA讀取器上測(cè)量目標(biāo)波長(zhǎng)下的光密度在加入停止溶液后30分鐘內(nèi)。

7.數(shù)據(jù)分析

計(jì)算每組重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸光度值，樣品和對(duì)照。如果單個(gè)吸光度值與相應(yīng)的吸光度值相差超過15%平均值，則認(rèn)為結(jié)果可疑，應(yīng)重新分析樣品。通過使用能夠從而產(chǎn)生良好的曲線擬合。如果樣品已被稀釋，則根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定的濃度必須乘以稀釋系數(shù)。