SiR-Actin基于F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合天然產(chǎn)物茉莉素內(nèi)酯。SiR-Actin具有熒光、細(xì)胞滲透性和對(duì) F-肌動(dòng)蛋白的高度特異性。Sir-肌動(dòng)蛋白染色內(nèi)源性 F-肌動(dòng)蛋白，無需遺傳操作或過度表達(dá)。它在遠(yuǎn)紅光中的發(fā)射最大限度地減少了光毒性和樣品自發(fā)熒光。SiR-Actin與GFP和/或m-櫻桃熒光蛋白相容。它可以使用標(biāo)準(zhǔn) Cy5 濾光片集進(jìn)行成像。SiR-肌動(dòng)蛋白可用于活細(xì)胞和組織中的寬場(chǎng)、共聚焦、SIM 或 STED 成像。探針數(shù)量允許 50 – 200 次染色實(shí)驗(yàn)。

艾美捷 SiR-Actin試劑盒#CY-SC001光學(xué)特性：

λ腹肌652 納米

λ埃姆674 納米

ε.max1.0·105摩爾-1·厘米-1

*基于以下條件：0.5 – 1 ml染色溶液/0.5 – 1 uM探針濃度的染色實(shí)驗(yàn)。通過減少體積或探針濃度，可以進(jìn)一步增加染色實(shí)驗(yàn)的數(shù)量。

SiR-Actin試劑盒使用注意事項(xiàng)：

注：該方案使用粘附在蓋玻片上的人成纖維細(xì)胞進(jìn)行了優(yōu)化，并已在其他常見疾病中得到證實(shí)細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)方案的建議應(yīng)作為起點(diǎn)，并為每種方案提供極-佳標(biāo)記條件，細(xì)胞類型應(yīng)該根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來確定。SiR肌動(dòng)蛋白是以肌動(dòng)蛋白穩(wěn)定藥物茉莉花內(nèi)酯為基礎(chǔ)的。因此，它可以修改活細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)。而有絲分裂持續(xù)時(shí)間在濃度高達(dá)3時(shí)保持不變mM SiR肌動(dòng)蛋白，濃度高于100nM導(dǎo)致培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞中的細(xì)胞增殖指數(shù)降低1）。如果計(jì)劃進(jìn)行長(zhǎng)期成像實(shí)驗(yàn)肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)是至關(guān)重要的，我們建議保持SiR肌動(dòng)蛋白的濃度等于或低于100nM。出于其他目的：

1.建議使用M SiR肌動(dòng)蛋白進(jìn)行染色。

準(zhǔn)備1mM儲(chǔ)備溶液。將小瓶中的SiR肌動(dòng)蛋白溶解在50μL無水二甲基亞砜中，制成1mM原液解決方案該溶液應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C或更低的溫度下。不要把溶液分成小份，它們會(huì)腐爛得更快并且該化合物不會(huì)通過多次凍融循環(huán)而改變。如果儲(chǔ)存得當(dāng)，該儲(chǔ)備溶液應(yīng)穩(wěn)定三年

月或更長(zhǎng)時(shí)間。如果需要準(zhǔn)確測(cè)定儲(chǔ)備溶液的濃度，則稀釋1ml在99中的1mM儲(chǔ)備溶液

ml含有0.2%十二烷基硫酸鈉的PBS。在室溫下15分鐘后，測(cè)量652nm處的吸光度。計(jì)算使用上面給出的消光系數(shù)的濃度。

2.準(zhǔn)備染色溶液。

在細(xì)胞培養(yǎng)基（例如DMEM+10%胎牛）中將SiR肌動(dòng)蛋白稀釋至所需濃度血清）和渦流。由于染色效率可能取決于細(xì)胞系，因此建議用1mM在首先嘗試快速獲得強(qiáng)染色，然后在進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中降低SiR肌動(dòng)蛋白濃度，直到極-佳實(shí)現(xiàn)染色（參見下面的標(biāo)記濃度和培養(yǎng)時(shí)間表）。一些細(xì)胞系可能表達(dá)高水平的外排泵，并且被SiR肌動(dòng)蛋白染色不良。增加10mM維拉帕米，一種廣譜外排泵抑制劑，在染色中溶液通常會(huì)大大改善染色效果。

SiR-Actin試劑盒儲(chǔ)存方法：

將化合物儲(chǔ)存在-20°C以下。準(zhǔn)備使用無水DMSO的化合物溶液。保持使用后低于-20°C的化合物溶液。小瓶之前應(yīng)允許將其加熱至室溫開放如果儲(chǔ)存得當(dāng)，化合物應(yīng)穩(wěn)定了幾個(gè)月。注：二甲基亞砜溶液應(yīng)特別小心處理，因?yàn)橐阎谆鶃嗧看龠M(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。處置這些試劑符合當(dāng)?shù)厮邢嚓P(guān)規(guī)定條例。

相關(guān)文獻(xiàn)參考：

1. Fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton, G. Lukinavi?ius et al., Nature Methods, 11, 731–733 (2014)