Sepdex G25是一種凝膠過(guò)濾介質(zhì), 利用凝膠的孔徑大小,實(shí)現(xiàn)不同分子量的物質(zhì)的分離和純化。以葡聚糖為基質(zhì)的凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)，其工作原理主要是利用具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的葡聚糖凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離樣品中各組分相對(duì)分子質(zhì)量大小的差異進(jìn)行分離。

艾美捷Sephadex G25，葡聚糖凝膠G-25：

目錄號(hào)：C-BETB002

尺寸：

1.樹(shù)脂：10mL、50mL、100mL、250mL、500mL、1L；

2.預(yù)包裝柱：5mL柱

儲(chǔ)存：20%乙醇或0.01M NaOH，4-30°C

Sephadex G25，葡聚糖凝膠G-25應(yīng)用實(shí)例：

色譜柱：XK16/30脫鹽柱，柱高25cm（Sephadex G25M）。

平衡緩沖液：20mM PB+150mM NaCl，pH 7.0，通過(guò)0.45μm過(guò)濾器過(guò)濾。

流速：2 mL/min。

柱平衡：將色譜柱連接到純化儀器上，用2-3柱體積（CV）的平衡緩沖液洗滌脫鹽柱。

樣品裝載：添加1 mL樣品，為了極大限度地延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，樣品應(yīng)在裝載前進(jìn)行澄清，例如以10000 g離心10分鐘或通過(guò)0.45μm過(guò)濾器過(guò)濾。洗脫：使用不超過(guò)建議zui大流速的流速，用平衡緩沖液洗滌脫鹽柱至少2 CV。

柱填料

1.凝膠懸浮液的制備

計(jì)算所需膨脹介質(zhì)的量（每1L柱床體積約1.15 kg沉淀凝膠）。例如，對(duì)于床高為10cm的16/20柱，膨脹介質(zhì)的所需量為

πx（1.6/2）2×10×1.15=23.11g。在干凈的燒杯中稱取23.11g介質(zhì)，并加入一定量（例如，12mL）的包裝溶液。攪拌形成均勻的凝膠懸浮液。

2.柱填料

2.1檢查色譜柱，確保所有成分完好無(wú)損、清潔。安裝底部玻璃料，擰緊O型環(huán)，并將立柱垂直固定在鐵支架上。使用水準(zhǔn)儀檢查并調(diào)整立柱使其水平。

2.2向色譜柱中加入適量的填料溶液以除去空氣。擰上底部塞子，在柱中留下1-2cm的填充溶液。

2.3使用玻璃棒沿柱內(nèi)壁引導(dǎo)凝膠懸浮液，并連續(xù)傾倒，以最大限度地減少氣泡的產(chǎn)生。讓介質(zhì)自然沉淀，直到體積不再變化，此時(shí)，介質(zhì)和溶液將形成不同的層，上層完-全透明。

2.4將頂部玻璃料連接到低壓色譜系統(tǒng)，并以一定的流速啟動(dòng)泵，以清除管道中的任何殘留空氣。暫停系統(tǒng)，將頂部玻璃料安裝到柱上，玻璃料的底端高于凝膠表面約1厘米。擰緊O形環(huán)并以300-500 cm/h的流速泵送色譜柱，直到床體積不再變化。繼續(xù)包裝5-10分鐘，并用記號(hào)筆標(biāo)記凝膠表面的位置。

2.5暫停系統(tǒng)，擰上底部插頭，斷開(kāi)立柱與泵的連接，向下旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)桿，使其停止在標(biāo)記位置下方0-0.5 cm處。擰上頂部塞子以完成柱填料。

3.清潔和再生

就地清潔是為了去除變性蛋白質(zhì)、脂蛋白或脂質(zhì)。常用的清洗溶液包括0.2 M NaOH或非離子洗滌劑，柱應(yīng)使用2-3 CV清洗。

4.儲(chǔ)存條件

室溫下儲(chǔ)存在20%乙醇或0.01M氫氧化鈉中。