DNA甲基化是通過在胞嘧啶環(huán)的5-碳上共價添加一個甲基基團（CH3），從而形成5-甲基胞嘧啶（5-mC）。DNA甲基化在調(diào)節(jié)幾乎所有生物過程中的基因表達中起著至關(guān)重要的作用，包括發(fā)育、生長和分化。DNA甲基化的改變已被證明會導(dǎo)致基因表達的變化。例如，高甲基化會導(dǎo)致基因沉默或基因表達降低，而低甲基化則激活基因或增加基因表達。異常的DNA甲基化也與疾病的病因有關(guān)，如癌癥、自身免疫性疾病和精神分裂癥。因此，全基因組DNA甲基化分析可以提供有價值的信息，用于發(fā)現(xiàn)用于疾病診斷的表觀遺傳標記，以及用于治療的潛在靶點。

目前，全基因組亞硫酸鹽測序（WGBS）或簡化代表性亞硫酸鹽測序（RRBS）等幾種方法用于全基因組DNA甲基化分析。這些方法將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而5-mC在亞硫酸鹽處理中保持不變。這允許將表觀遺傳差異解釋為遺傳差異，然后可以通過單堿基分辨率和全基因組范圍內(nèi)的測序來檢測。然而，實現(xiàn)這一點的傳統(tǒng)方法仍然沒有實際應(yīng)用，因為（1）這些方法需要大量的DNA（>1微克）作為輸入材料，這在從有限的生物樣本（如腫瘤活檢樣本、早期胚胎、胚胎組織和循環(huán)DNA）中制備是困難的；（2）這些方法要求DNA首先被剪切，然后與適配器連接，接著進行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化（連接后亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化）。這個過程導(dǎo)致大多數(shù)包含在適配器-DNA片段構(gòu)建中的DNA片段斷裂，從而形成單標簽?zāi)０澹谖膸旄患袑⒈灰瞥?。因此，在進行全基因組亞硫酸鹽測序時會出現(xiàn)不w全覆蓋和偏差；以及（3）這些方法耗時（2天）。為了克服這些方法的弱點，EpigenTek提供了EpiNext™高靈敏度亞硫酸鹽測序試劑盒（Illumina）（#P-1056A）。

艾美捷亞硫酸氫鹽測序試劑盒特點：

創(chuàng)新方法：允許同時進行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化和適當大小的DNA片段化。亞硫酸鹽處理后的DNA可以直接連接到適配器，從而消除了通常在使用全基因組亞硫酸鹽測序（WGBS）和簡化代表性亞硫酸鹽測序（RRBS）方法時發(fā)生的適配器連接片段斷裂的可能性。

快速且流程簡化的程序：從DNA亞硫酸鹽處理到準備好的文庫DNA，整個過程可以在6小時30分鐘內(nèi)完成。

w全轉(zhuǎn)化：將未甲基化的胞嘧啶w全轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（>99%），同時對甲基胞嘧啶到胸腺嘧啶的不當或錯誤轉(zhuǎn)化忽略不計。

高靈敏度和高效率：創(chuàng)新的亞硫酸鹽DNA適配器連接消除了片段丟失和選擇偏差，使得輸入DNA可以低至0.2納克，非常適合對珍貴且有限的樣本進行甲基化分析。該試劑盒可用于非條形碼（單重）和條形碼（多重）DNA文庫的準備。

極其方便：試劑盒包含DNA文庫準備每個步驟所需的所有組分，足夠進行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化、連接、清潔、大小選擇和文庫擴增，從而使亞硫酸鹽DNA文庫準備流程化，以獲得可靠和一致的結(jié)果。

最小偏差：超高頻（Ultra HiFi）擴增能夠以最小的序列偏差和低錯誤率獲得可重復(fù)的高產(chǎn)量DNA文庫。

廣泛的樣本適用性：起始材料可以是來自各種組織/細胞樣本的基因組DNA，如新鮮和冷凍組織、培養(yǎng)瓶或微孔板中的培養(yǎng)細胞、顯微切割樣本、石蠟包埋組織、活檢、胚胎細胞、血漿/血清樣本以及體液樣本等。來自各種富集反應(yīng)的DNA，如ChIP、MeDIP/hMeDIP或外顯子捕獲，也可以作為起始材料。

亞硫酸氫鹽測序試劑盒檢測原理：

該試劑盒包含了直接使用微量輸入DNA生成的亞硫酸鹽DNA成功制備文庫所需的所有試劑。在這種制備過程中，DNA在亞硫酸鹽處理的同時被轉(zhuǎn)化為適當長度的片段。經(jīng)過亞硫酸鹽處理的DNA，以單鏈形式存在，隨后同時轉(zhuǎn)化為雙鏈DNA并連接適配器。連接后的片段使用MQ結(jié)合珠進行大小選擇和純化，然后使用高保真度PCR混合液進行擴增，這確保了從最小量的起始材料中獲得最大產(chǎn)量，并以低錯誤率和最小偏差提供了文庫DNA的高度精確擴增。