熒光三NTA化合物為聚組氨酸標記蛋白的位點特異性和穩(wěn)定的非共價熒光標記提供了一種有效的方法。與傳統(tǒng)單NTA的瞬時結(jié)合相比，三NTA共軛熒光團的多價相互作用與聚組氨酸標記的蛋白質(zhì)形成了更穩(wěn)定的復(fù)合物。tris-NTA化合物對累積組氨酸的高選擇性使其能夠選擇性標記細胞裂解物和活細胞表面的蛋白質(zhì)。熒光三NTA偶聯(lián)物可用于分析溶液和表面上的三元蛋白質(zhì)復(fù)合物。過渡金屬離子（如鎳離子）介導(dǎo)的聚組氨酸標記蛋白質(zhì)與熒光tris-NTA偶聯(lián)物的絡(luò)合為實時檢測和監(jiān)測蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用提供了靈敏的報告。據(jù)報道，這種OG488 tris-NTA化合物是一種靈敏的熒光探針，用于檢測細胞、溶液和固體表面中的聚組氨酸標記蛋白。

艾美捷HIS Lite OG488-Tris NTA-Ni復(fù)合物：

貨號 AAT-12615

單位大?。?span style="font-family: Calibri;">100微克

目錄編號：12615

分子量：1838.08

溶劑：水

校正因子（260納米）：0.31

校正因子（280納米）：0.12

消光系數(shù)（cm -1 M -1）：76000

激發(fā)（納米）：498

發(fā)射（納米）：526

預(yù)期用途：僅供研究使用（RUO）

儲存：冷凍（<-15°C）；盡量減少光照

激發(fā)：藍色激光

發(fā)射：長路徑綠色濾光片（SYBR濾光片）

庫存溶液的準備：除非另有說明，所有未使用的庫存溶液應(yīng)在制備后分成單次使用的小份，并儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融。

HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni復(fù)合物庫存溶液：通過添加適量的去離子水（ddH2O）制備5至10毫摩爾的庫存溶液。

注意：將任何未使用的庫存溶液儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融，并盡量減少光照。

工作溶液的準備：

HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni復(fù)合物工作溶液

在PBS中制備1至10微米濃度的HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni復(fù)合物工作溶液。

注意：確保有足夠的工作溶液w全浸沒凝膠。使用后，丟棄工作溶液，不要重復(fù)使用。

樣品實驗協(xié)議：

以下協(xié)議僅作為指導(dǎo)，并可能需要優(yōu)化以更好地適應(yīng)您的具體實驗需求。

跑后凝膠染色協(xié)議：

根據(jù)您的標準協(xié)議運行凝膠。

將凝膠放置在合適的容器中。將凝膠固定在固定液中60分鐘。注意：40%乙醇+10%醋酸可以作為固定液。

用超純水兩次洗滌凝膠。

將凝膠在HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni復(fù)合物工作溶液中孵育60分鐘。

注意：確保凝膠w全浸沒在工作溶液中。

移除工作溶液，并用PBS兩次洗滌凝膠。

立即進行凝膠成像。

體外復(fù)合物形成：

將帶有His標簽的蛋白溶液與HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni復(fù)合物工作溶液按適當濃度混合。

注意：必須對HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni復(fù)合物與帶有His標簽的蛋白混合物進行優(yōu)化，以獲得更好的標記。

注意：1至10微米的HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni復(fù)合物可以用作起始濃度。

注意：反應(yīng)可以在含有50 mM HEPES/KOH, pH 7.4, 100 mM KCl, 1 mM MgCl2, 2 mM β-巰基乙醇，5%甘油的緩沖液中進行，或者在您選擇的緩沖液中進行。

混合物可以在室溫下孵育30分鐘，或在4°C下孵育。

注意：必須對孵育時間和條件進行優(yōu)化，以獲得更好的標記。

然后，混合物可以進行柱純化或任何其他下游處理。