Cas9（CRISPR相關(guān)蛋白9）是一種由RNA引導(dǎo)的DNA內(nèi)切酶。這種酶與CRISPR（成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列）適應(yīng)性免疫系統(tǒng)相關(guān)，存在于多種細菌中，包括化膿性鏈球菌（Streptococcus pyogenes）。Cas9能夠解開外來DNA（如質(zhì)粒DNA或入侵噬菌體DNA），然后檢查是否存在與引導(dǎo)RNA的20個堿基間隔區(qū)互補的位點。如果DNA底物與引導(dǎo)RNA互補，Cas9會切割入侵的DNA。

Cas9蛋白因其作為基因組工程工具而引起全球關(guān)注，它能夠在DNA中引起定點的雙鏈斷裂。由此產(chǎn)生的DNA斷裂可以通過非同源末端連接和同源重組分別失活基因或引入異源基因，這在許多實驗室模型生物中得到了應(yīng)用。此外，Cas9幾乎可以切割與其相關(guān)引導(dǎo)RNA互補的任何序列。在人類細胞中，已通過CRISPR/Cas9系統(tǒng)實現(xiàn)了基因敲除和基因替換。

圖1：CRISPR/Cas9 DNA編輯

艾美捷Cas9(CRISPR相關(guān)蛋白9)ELISA檢測試劑盒是一種酶免疫測定法，用于檢測和定量細胞或組織裂解液樣本中的化膿性鏈球菌Cas9。該試劑盒的檢測靈敏度下限為1.5 ng/mL Cas9。每套試劑盒提供足夠的試劑，可進行多達96次檢測，包括標準曲線和未知樣本。

Cas9(CRISPR相關(guān)蛋白9)ELISA檢測試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

1. AKR-120：GFP定量試劑盒，熒光法  

2. AKR-121：GFP ELISA試劑盒  

3. AKR-122：RFP ELISA試劑盒  

4. AKR-130：His標簽蛋白ELISA試劑盒  

Cas9(CRISPR相關(guān)蛋白9)ELISA檢測試劑盒（#PRB-5079）組成：

盒子1（室溫運輸）：

1. 抗Cas9抗體包被板（部件編號50791B）：一個96孔條板（8×12）。  

2. 生物素標記抗Cas9抗體（1000倍稀釋）（部件編號50792C）：一個10 µL小瓶。  

3. 鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物（部件編號310803）：一個20 µL小瓶。  

4. 檢測稀釋液（部件編號310804）：一個50 mL瓶。  

5. 10倍洗液（部件編號310806）：一個100 mL瓶。  

6. 底物溶液（部件編號310807）：一個12 mL棕色瓶。  

7. 終止液（部件編號310808）：一個12 mL瓶。  

盒子2（藍色冰袋運輸）：

1. Cas9標準品（部件編號50793D）：一個50 µL小瓶，含5 µg/mL重組化膿性鏈球菌Cas9。  

未提供材料：

1. 細胞或組織裂解液  

2. 含0.1% BSA的PBS  

3. RIPA緩沖液  

儲存：

收貨后，將Cas9標準品分裝并儲存于-80°C，以避免多次凍融循環(huán)。將生物素標記抗Cas9抗體儲存于-20°C。將其他所有組分儲存于4°C。  

樣本準備：

以下建議僅供參考，可根據(jù)用戶的實驗設(shè)計進行優(yōu)化或調(diào)整。  

- 細胞或組織裂解液：在裂解緩沖液（如RIPA緩沖液，25 mM Tris-HCl，pH 7.6，150 mM NaCl，1% NP-40，1%牛磺膽酸鈉，0.1% SDS）中超聲處理或勻漿樣本，然后在4°C下以10,000 x g離心10分鐘。立即進行檢測，或在-80°C下儲存樣本，最長可達三個月。根據(jù)需要，將樣本稀釋于含0.1% BSA的PBS中。

檢測步驟：

1. 向抗Cas9抗體包被板中加入100 µL Cas9未知樣本或標準品。每個Cas9未知樣本、標準品和空白對照均需進行雙份檢測。  

2. 在室溫下于軌道振蕩器上孵育1小時。  

3. 每孔加入250 µL 1倍洗液，洗滌微孔條3次，每次洗滌后c底吸干。最后一次洗滌后，倒空孔內(nèi)液體，并將微孔條在吸水墊或紙巾上輕拍以去除多余的1倍洗液。  

4. 向每孔中加入100 µL稀釋后的生物素標記抗Cas9抗體。在室溫下于軌道振蕩器上孵育1小時。  

5. 按步驟3洗滌條孔3次。  

6. 向每孔中加入100 µL稀釋后的鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物。在室溫下于軌道振蕩器上孵育1小時。  

7. 按步驟3洗滌條孔3次，然后立即進行下一步。  

8. 將底物溶液平衡至室溫。向每孔（包括空白孔）中加入100 µL底物溶液，在室溫下于軌道振蕩器上孵育。實際孵育時間可能在2-30分鐘之間。  

注意：仔細觀察平板；如果顏色迅速變化，可能需要提前終止反應(yīng)，以防止飽和。  

9. 向每孔（包括空白孔）中加入100 µL終止液，終止酶反應(yīng)。結(jié)果應(yīng)立即讀?。伾珪S時間消退）。  

10. 使用450 nm作為主波長，在分光光度計上讀取每個微孔的吸光度。

Cas9(CRISPR相關(guān)蛋白9)ELISA檢測試劑盒文獻參考：

1. Heler, R; Samai, P; Modell, J. W.; Weiner, C; Goldberg, G. W.; Bikard, D; Marraffini, L. A.(2015). Nature. 519 :199–202.

2. Jinek, M.; Chylinski, K.; Fonfara, I.; Hauer, M.; Doudna, J. A.; Charpentier, E. (2012). Science.337: 816–821.

3. Mali, Prashant; Esvelt, Kevin M; Church, George M (2013). Nature Meth. 10: 957-963.

4. Mali, Prashant; Aach, John; Stranges, P Benjamin; Esvelt, Kevin M; Moosburner, Mark; Kosuri,Sriram; Yang, Luhan; Church, George M (2013). Nature Biotech. 31: 833-838.

5. Gilbert, Luke A.; Larson, Matthew H.; Morsut, Leonardo; Liu, Zairan; Brar, Gloria A.; Torres,Sandra E.; Stern-Ginossar, Noam;Brandman, Onn; Whitehead, Evan H.; Doudna, Jennifer A.;Lim, Wendell A.; Weissman, Jonathan S.; Qi, Lei S. (2013). Cell. 154: 442-451.

6. Zheng Q, Cai X, Tan MH, Schaffert S, Arnold CP, Gong X, Chen C-Z, and Huang S. (2014)BioTechniques 57:115-124.