脂質(zhì)過(guò)氧化是動(dòng)物和植物細(xì)胞損傷的一個(gè)明確機(jī)制。脂質(zhì)過(guò)氧化物是細(xì)胞氧化應(yīng)激的不穩(wěn)定指標(biāo)，它們會(huì)分解形成更復(fù)雜且更具反應(yīng)性的化合物，例如異前列腺素。異前列腺素是一種通過(guò)氧自由基誘導(dǎo)組織磷脂和脂蛋白的過(guò)氧化而產(chǎn)生的非酶促合成的二十烷類化合物。異前列腺素是類似前列腺素的化合物，正常情況下會(huì)出現(xiàn)在血漿和尿液樣本中，但在組織、血漿和尿液中，它們的水平會(huì)因氧化應(yīng)激而升高。

8-異前列腺素F2α（也稱為8-表前列腺素F2α、8-異前列腺素或15-異前列腺素F2t）是一種已被證明可用于體內(nèi)氧化應(yīng)激評(píng)估的異前列腺素。它是由花生四烯酸衍生的非環(huán)氧化酶和環(huán)氧化酶過(guò)氧化途徑在膜磷脂中產(chǎn)生的。8-異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）是一種強(qiáng)效的血管收縮劑，也是3T3細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞中的誘變劑，可能是一種能夠改變膜完整性的病理生理介質(zhì)。它與動(dòng)脈粥樣硬化的形成有關(guān)，其水平升高與肝腎綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、致癌作用以及動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)。8-iso-PGF2α在血漿中循環(huán)，并通過(guò)尿液排出。8-iso-PGF2α以酯化低密度脂蛋白磷脂和游離酸的形式循環(huán)。正常人血漿和尿液中的8-iso-PGF2α水平分別約為40-100 pg/mL和約190 pg/mg肌酐。測(cè)定總8-iso-PGF2α的方法通常需要對(duì)組織中的8-iso-PGF2α酯進(jìn)行堿水解，隨后進(jìn)行提取、相分離和薄層色譜分析。

OxiSelect™ 8-異前列腺素F2α ELISA試劑盒是一種用于快速檢測(cè)和定量8-iso-PGF2α的酶免疫分析方法。通過(guò)將樣本中的8-iso-PGF2α吸光度與已知8-iso-PGF2α標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度進(jìn)行比較，來(lái)確定樣本中8-iso-PGF2α的含量。每套試劑盒提供的試劑足以進(jìn)行多達(dá)96次測(cè)定，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線和未知樣本的測(cè)定。

艾美捷OxiSelect 8-異前列腺素F2a ELISA試劑盒（#STA-337）測(cè)定原理：

Cell Biolabs的8-iso-PGF2α試劑盒是一種競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），用于測(cè)定血漿、尿液、血清或組織提取物等多種生物樣本中的8-iso-PGF2α水平。將抗8-iso-PGF2α抗體在預(yù)先包被的微孔板孔中孵育。洗滌后，將8-iso-PGF2α標(biāo)準(zhǔn)品或處理過(guò)的樣本與8-iso-PGF2α-HRP偶聯(lián)物混合，并同時(shí)加入孔中。未偶聯(lián)的（游離的）8-iso-PGF2α和8-iso-PGF2α-HRP偶聯(lián)物會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地與結(jié)合在板上的抗體結(jié)合。經(jīng)過(guò)短暫孵育和洗滌后，加入HRP底物。HRP活性導(dǎo)致的顏色變化與結(jié)合到板上的8-iso-PGF2α偶聯(lián)物的量成正比，與樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中游離8-iso-PGF2α的量成反比。通過(guò)與已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，確定未知樣本中的8-iso-PGF2α含量。在進(jìn)行測(cè)定之前，請(qǐng)仔細(xì)閱讀完整的試劑盒說(shuō)明書(shū)。

相關(guān)產(chǎn)品：

1. STA-320：OxiSelect™氧化DNA損傷ELISA試劑盒（8-OHdG定量）  

2. STA-325：OxiSelect™氧化RNA損傷ELISA試劑盒（8-OHG定量）  

3. STA-330：OxiSelect™ TBARS測(cè)定試劑盒（丙二醛定量）  

4. STA-344：OxiSelect™過(guò)氧化氫/過(guò)氧化物酶測(cè)定試劑盒  

5. STA-347：OxiSelect™體外ROS/RNS測(cè)定試劑盒（綠色熒光）

OxiSelect 8-異前列腺素F2a ELISA試劑盒組成：

1. 山羊抗兔抗體包被板（編號(hào)250001）：一個(gè)96孔條板。  

2. 抗8-iso-PGF2α抗體（編號(hào)233701）：一個(gè)20微升裝的抗8-iso-PGF2α兔IgG管。  

3. 樣本稀釋液（編號(hào)233702）：一個(gè)50毫升瓶。  

4. 中和液（編號(hào)233705）：一個(gè)20毫升瓶。  

5. 10倍洗滌緩沖液（編號(hào)310806）：一個(gè)100毫升瓶。  

6. 底物溶液（編號(hào)310807）：一個(gè)12毫升琥珀色瓶。  

7. 終止液（編號(hào)310808）：一個(gè)12毫升瓶。  

8. 8-iso-PGF2α標(biāo)準(zhǔn)品（編號(hào)233703）：一個(gè)25微升裝的200微克/毫升8-iso-PGF2α（溶于DMSO）管。  

9. 8-iso-PGF2α-HRP偶聯(lián)物（編號(hào)233704）：一個(gè)70微升裝的8-iso-PGF2α-HRP偶聯(lián)物管。

未提供的材料：

1. 蛋白質(zhì)樣本，如純化蛋白、血漿、血清、細(xì)胞裂解液等。  

2. 去離子水。  

3. 樣本提取和純化所需的試劑和材料。

儲(chǔ)存條件：

- 收到后，將抗8-iso-PGF2α抗體、8-iso-PGF2α-HRP偶聯(lián)物和8-iso-PGF2α標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存于-20攝氏度。根據(jù)需要分裝，以避免反復(fù)凍融。  

- 將試劑盒中的其他組分儲(chǔ)存于4攝氏度。  

- 任何部分使用或未使用的組分應(yīng)恢復(fù)到適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存溫度。

樣本準(zhǔn)備：

為了測(cè)量游離和酯化的異前列腺素，需要對(duì)與脂蛋白或磷脂結(jié)合的8-異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）進(jìn)行水解。為了水解這種酯鍵，通常用2N氫氧化鈉在45攝氏度下處理樣本2小時(shí)。

- 血清、血漿、組織裂解液樣本：使用1份10N氫氧化鈉處理4份液體樣本。在45攝氏度下孵育2小時(shí)后，每500微升水解樣本加入100微升濃（10N）鹽酸。加入后樣本可能會(huì)變渾濁。在微型離心機(jī)中以12,000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘。清澈的上清液可用于測(cè)定，或儲(chǔ)存于-20攝氏度或更低溫度以備后用。在測(cè)定前，請(qǐng)確保每個(gè)中和后的樣本pH值在6-8之間。如果不在該范圍內(nèi)，通過(guò)將100微升樣本加入100微升提供的中和液中，將pH值調(diào)整到該范圍內(nèi)。  

- 尿液樣本：在ELISA之前，需要對(duì)尿液樣本進(jìn)行酸水解，以分解將脂質(zhì)和非脂質(zhì)成分結(jié)合在一起的鍵。通過(guò)加入1/10體積的1N鹽酸將尿液樣本酸化至pH 3.0（例如：向1毫升尿液樣本中加入100微升1N鹽酸）。酸化后的尿液樣本應(yīng)在PBS或樣本稀釋液中進(jìn)一步稀釋1:4至1:8，然后進(jìn)行ELISA。

結(jié)果示例：

以下圖表展示了典型的8-iso-PGF2α結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實(shí)際結(jié)果。  

圖1：8-iso-PGF2α ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線  

圖2：用8-iso-PGF2α ELISA檢測(cè)的人尿液稀釋液

OxiSelect 8-異前列腺素F2a ELISA試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Banerjee, M., Kang, K.H., Morrow, J.D., et al. (1992) Am. J. Physiol. 263: H660-H663.

2. Morrow, J.D., Hill, K.E., Burk, R.F., et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87: 9383-9387.

3. Morrow, J.D., Harris, T.M., Roberts, L.J. (1990) Anal. Biochem. 184: 1-10.

4. Vacchiano, C.A., and Tempel, G.E. (1994) J. Appl. Physiol. 77: 2912-2917.

5. Wang, Z., Ciabattoni, G., Cre’minon, C., et al. (1995) Pharmacol. Exp. Ther. 275: 94-100.