IgM檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯(lián)免疫測定法（ELISA），用于測量小鼠體內(nèi)的IgM生物樣本。如果ELISA要在預期用途之外使用，用戶可能需要優(yōu)化所述使用。

雙抗體夾心ELISA原理：

在此檢測中，樣本中存在的IgM與吸附在聚苯乙烯微量滴定板孔表面的抗IgM抗體發(fā)生反應(yīng)。經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗IgM抗體。這些酶標記的抗體與之前結(jié)合的IgM形成復合物。經(jīng)過另一次洗滌步驟后，通過加入顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來檢測與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與樣本中IgM的濃度成正比；因此，450 nm處的吸光度是測試樣本中IgM濃度的衡量指標?？梢酝ㄟ^從標準曲線（由標準品構(gòu)建）中插值得到測試樣本中IgM的量，并根據(jù)樣本稀釋情況進行校正。

僅限研究使用。不得用于診斷目的。僅限體外使用。

當w全理解包裝插頁說明中的信息，并遵循良好的實驗室操作規(guī)范時，可以獲得可靠且可重復的結(jié)果?？赡苡绊憴z測性能的因素包括儀器功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質(zhì)量，以及試劑和樣本移液、洗滌技術(shù)、孵育時間或溫度的準確性。不要將不同批次或來源的試劑混合或替換。

艾美捷小鼠IgM ELISA試劑盒（#E-90M）組成

試劑盒及其組分的有效期在包裝標簽上標明。如果按照本試劑盒協(xié)議插頁的要求儲存和使用，所有組分在有效期內(nèi)均應(yīng)穩(wěn)定。

所需材料（但未提供）：

精密移液管（2 uL至100 uL），用于制備和分裝稀釋液

試管

噴霧瓶或微量滴定板洗滌/抽吸裝置

蒸餾水或去離子水

微量滴定板讀取器

用于制備試劑和緩沖液溶液的各種玻璃器皿

用于樣本收集的離心機

用于血漿收集的抗凝劑

計時器

樣本采集與處理：

所有血液成分和生物材料都應(yīng)被視為潛在危險品。在處理和丟棄時應(yīng)遵循普遍預防措施。

如果血液樣本凝固、嚴重溶血、乳糜血或樣本完整性受到質(zhì)疑，請做好記錄，并謹慎解讀結(jié)果。

以下樣本采集和儲存條件僅供參考。樣本穩(wěn)定性尚未經(jīng)過評估。

血清樣本：通過靜脈穿刺采集血液。血凝塊形成后，通過離心將血清與細胞分離。立即進行檢測，或分裝后將樣本儲存于–80°C（優(yōu)先）或–20°C。避免反復凍融。

血漿樣本：將血液采集到含有抗凝劑的容器中，然后離心。立即進行檢測，或分裝后將樣本儲存于–80°C（優(yōu)先）或–20°C。避免反復凍融。

尿液樣本：使用無菌或干凈的尿液收集器采集中段尿。離心去除細胞碎片。立即進行檢測，或分裝后將樣本儲存于–80°C（優(yōu)先）或–20°C。避免反復凍融。

已知干擾物：濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會抑制酶反應(yīng)。

樣本稀釋：

檢測要求每個測試樣本在使用前必須進行稀釋。每次進行檢測時，所有樣本都應(yīng)進行雙份檢測。推薦的稀釋倍數(shù)僅供參考。稀釋倍數(shù)應(yīng)根據(jù)未知樣本的預期濃度來確定，使稀釋后的樣本落在標準曲線的動態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平，在運行整個板之前，建議先用一兩個代表性樣本進行系列稀釋。

血清樣本：推薦起始稀釋倍數(shù)為1/10,000。要制備1/10,000稀釋液，將5 uL樣本轉(zhuǎn)移到495 uL 1X稀釋液中。得到1/100稀釋液。接下來，將5 uL 1/100稀釋液轉(zhuǎn)移到495 uL 1X稀釋液中。得到1/10,000稀釋液。每個階段充分混合。

血漿樣本：推薦起始稀釋倍數(shù)為1/10,000。要制備1/10,000稀釋液，將5 uL樣本轉(zhuǎn)移到495 uL 1X稀釋液中。得到1/100稀釋液。接下來，將5 uL 1/100稀釋液轉(zhuǎn)移到495 uL 1X稀釋液中。得到1/10,000稀釋液。每個階段充分混合。

試劑準備：

在使用前將所有試劑恢復至室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液：提供的稀釋液為5X濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水稀釋1/5（1份緩沖液濃縮液，4份水）。

洗滌液濃縮液：提供的洗滌液為20X濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水稀釋1/20（1份緩沖液濃縮液，19份水）。如果儲存溫度較低，濃縮液中可能會形成晶體。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶-抗體結(jié)合物：根據(jù)每個微量滴定板測試條的需要計算所需的工作結(jié)合物溶液量。對于每個用于測試的測試條，將10 uL酶-抗體結(jié)合物加入990 uL 1X稀釋液中。使用前立即稀釋并避光保存。均勻混合，但動作輕柔。避免起泡。

預包被的ELISA微量滴定板：按供應(yīng)狀態(tài)即可使用。打開鋁箔袋，取出板。將不會用于檢測的測試條和孔取下，放回袋中，并與干燥劑一起重新密封。

小鼠IgM校準品：根據(jù)批次特定的分析證書進行準備。

結(jié)果計算：

1. 從每個樣本的測試值中減去平均背景值（標準零的平均吸光度讀數(shù)）。

2. 對每個標準品的雙份讀數(shù)取平均值，并用結(jié)果構(gòu)建標準曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計算機軟件來處理數(shù)據(jù)，構(gòu)建標準曲線。也可以使用二階多項式（二次）或其他曲線擬合，但它們對數(shù)據(jù)的擬合精度較低。

3. 從標準曲線上插值得到測試樣本值。根據(jù)血清稀釋因子進行校正，以得到原始樣本中的IgM濃度。