β-羥基丁酸（BHB）是一種在長時(shí)間禁食、低碳水化合物攝入或劇烈運(yùn)動(dòng)期間產(chǎn)生的酮體。作為能量代謝和燃料利用中的關(guān)鍵參與者，BHB在葡萄糖供應(yīng)受限，為大腦、心臟和骨骼肌等多種組織提供替代能量來源。BHB還作為一種信號(hào)分子，影響基因表達(dá)、氧化應(yīng)激、炎癥和其他細(xì)胞過程。其代謝意義不僅限于能量供應(yīng)，還涉及多種生理和病理過程。AkrivisBio的BHB檢測試劑盒是一種簡單、靈敏的BHB含量測定方法。在檢測中，BHB被氧化生成NADH，隨后NADH用于將四氮雜卓還原為具有450納米吸收峰的高色素甲臜。該檢測的靈敏度適用于測量低至10微摩爾的BHB樣本。

艾美捷β-羥基丁酸測定試劑盒：

貨號(hào)：MA-0132

規(guī)格：100孔

樣本類型：血清、血漿、細(xì)胞裂解液、組織提取液、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)基

適用物種：通用（適用于所有物種）

檢測方法：比色法，檢測波長405納米

檢測類型：定量

應(yīng)用：基于微孔板的比色法檢測，用于定量檢測廣泛樣本中的胰蛋白酶活性。

靈敏度：0.05-0.1mU

儲(chǔ)存條件：4°C

運(yùn)輸條件：凝膠冷藏包

β-羥基丁酸測定試劑盒檢測組分：

-檢測緩沖液：25毫升，貨號(hào)WMMA-0132-A

-β-羥基丁酸脫氫酶：凍干粉，綠色，貨號(hào)MA-0132-B

-NAD/四氮雜卓混合液：凍干粉，紅色，貨號(hào)MA-0132-C

-β-羥基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品：凍干粉，黃色，貨號(hào)MA-0132-D

β-羥基丁酸測定試劑盒檢測原理：

1.β-羥基丁酸脫氫酶將BHB氧化為乙酰乙酸，生成NADH。

2.NADH將電子轉(zhuǎn)移至四氮雜卓，將其轉(zhuǎn)化為甲臜。

儲(chǔ)存和處理：

在使用前將試劑盒儲(chǔ)存于-20°C。使用前將檢測組分恢復(fù)至室溫。打開試劑瓶前請短暫離心。

-檢測緩沖液：直接使用，儲(chǔ)存于4°C。

-β-羥基丁酸脫氫酶：用220微升檢測緩沖液溶解。使用時(shí)保持在冰上，儲(chǔ)存于-20°C。

-NAD/四氮雜卓混合液：用220微升檢測緩沖液溶解，儲(chǔ)存于-20°C。

-β-HB標(biāo)準(zhǔn)品：用100微升去離子水溶解，配制成10mM的溶液，儲(chǔ)存于-20°C。

檢測步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：將10微升標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至90微升去離子水中，配制成0.4mM的工作溶液。將0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分別轉(zhuǎn)移至96孔板的多個(gè)孔中，用檢測緩沖液將所有孔的體積調(diào)整至50微升，得到每孔0、2、4、6、8、10納摩爾的BHB標(biāo)準(zhǔn)系列。

2.樣本準(zhǔn)備：體液中的β-HB含量差異較大（血清中為20微摩爾-5毫摩爾），尿液中可能更高。血液和尿液中的還原物質(zhì)可能會(huì)干擾檢測。使用10kDa離心過濾器可以減少這種干擾。向測試孔中加入1-50微升樣本，用檢測緩沖液將所有孔的體積調(diào)整至50微升。

-注意事項(xiàng)：

-還原物質(zhì)和其他所謂的基質(zhì)效應(yīng)可以輕松處理。請參閱下一頁，了解處理顯著干擾檢測的方法。

-在極少數(shù)情況下，樣本中存在還原型吡啶核苷酸NAD(P)H，可能會(huì)干擾檢測。在這種情況下，運(yùn)行一個(gè)背景對照，用2微升檢測緩沖液代替β-HB脫氫酶。從配對樣本中減去這個(gè)背景值，以獲得校正后的β-HB讀數(shù)。

-所有樣本讀數(shù)必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。如果讀數(shù)超出此范圍，請稀釋樣本并重新運(yùn)行。

3.啟動(dòng)反應(yīng)：每個(gè)反應(yīng)需要50微升反應(yīng)混合液。根據(jù)要運(yùn)行的總孔數(shù)準(zhǔn)備足夠的反應(yīng)混合液：

-反應(yīng)混合液：

-檢測緩沖液：46微升

-β-HB脫氫酶：2微升

-NAD/四氮雜卓混合液：2微升

-背景對照混合液：

-檢測緩沖液：48微升

-NAD/四氮雜卓混合液：2微升

-向含有β-HB標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的每個(gè)孔中加入50微升反應(yīng)混合液。

4.測量：在450納米處監(jiān)測反應(yīng)30分鐘。標(biāo)準(zhǔn)品會(huì)迅速顯色，但樣本的顯色可能會(huì)更慢。

5.計(jì)算：

-從所有標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)中減去0BHB標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)。繪制背景校正后的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

-確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，這將用于定義未知樣本中的BHB含量。通過從配對樣本中減去任何背景對照來校正未知樣本。將校正后的樣本讀數(shù)除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，以獲得樣本孔中的BHB納摩爾數(shù)。

-將這些值轉(zhuǎn)換回原始樣本中的BHB含量：

-A.孔中的BHB納摩爾數(shù)/加入孔中的樣本微升數(shù)=樣本中的BHB納摩爾數(shù)/微升

-B.樣本中的BHB納摩爾數(shù)/微升×樣本體積=樣本中的總BHB納摩爾數(shù)

-C.如果樣本因信號(hào)過高而稀釋，請乘以稀釋因子。

-注意：許多代謝物和其他化學(xué)物質(zhì)可能會(huì)顯著干擾各種反應(yīng)化學(xué)。為了更精確的測定，請?jiān)谟袩o恒定量樣本的情況下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線測定。不必運(yùn)行所有六個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品；至少使用3個(gè)（0-10-20微升）來驗(yàn)證吸光度響應(yīng)與分析物量呈線性關(guān)系。兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率應(yīng)相同。它們之間的吸光度偏差歸因于樣本中的分析物量（在本例中為β-羥基丁酸）。如果兩個(gè)斜率不同，則存在基質(zhì)效應(yīng)影響反應(yīng)化學(xué)。在這種情況下，確定0標(biāo)準(zhǔn)品之間的吸光度差異，并將其應(yīng)用于在樣本存在下運(yùn)行的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。

具有大矩陣效應(yīng)的樣品示例：

-0標(biāo)準(zhǔn)品之間的差異為0.35。在樣本存在下的斜率為0.226OD/納摩爾。

-樣本中具有基質(zhì)效應(yīng)的分析物量=0.35OD/0.226OD/納摩爾=1.55納摩爾