干細胞靜態(tài)懸浮培養(yǎng)方案:

VitroGel STEM 是一種無異種蛋白的水凝膠系統(tǒng)，用于提高三維（3D）培養(yǎng)的性能和擴大人類多能干細胞（hPSCs）群體的規(guī)模，以創(chuàng)建一個高通量系統(tǒng)來模擬各種組織和疾病狀態(tài)。VitroGel STEM 是即用型的，具有優(yōu)化的配方，w全支持快速擴展具有多能性的高質量3D干細胞球體。水凝膠系統(tǒng)可以通過不同的培養(yǎng)方法支持3D細胞生長，如3D水凝膠包埋、2D厚水凝膠涂層、水凝膠-細胞珠和靜態(tài)懸浮培養(yǎng)。

在本協(xié)議中，我們將重點介紹使用VitroGel STEM進行干細胞球體擴增和規(guī)?；a(chǎn)時的靜態(tài)懸浮培養(yǎng)方法。從液氮中直接解凍的hPSCs或從2D基質涂層培養(yǎng)容器中傳代的hPSCs可以立即與水凝膠溶液混合進行靜態(tài)懸浮培養(yǎng)。此外，優(yōu)化的協(xié)議非常適合時間敏感的實驗，因為它不需要頻繁的培養(yǎng)基更換，這最終可以節(jié)省時間和材料。VitroGel STEM與大多數(shù)hPSC培養(yǎng)基和組織培養(yǎng)容器兼容。由于d特的靜態(tài)懸浮培養(yǎng)協(xié)議方法，在大規(guī)模生物反應器中使用時不需要微載體，從而使細胞收獲更加簡單和高效。使用VitroGel STEM生產(chǎn)的3D干細胞球體可以用于進一步的亞培養(yǎng)、模式分化或重新建立2D培養(yǎng)形態(tài)。

作為TheWell Bioscience中國區(qū)代理，艾美捷科技強烈推薦TheWell Bioscience熱銷產(chǎn)品VitroGel STEM。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

工作流概述:

初始靜態(tài)懸浮培養(yǎng)協(xié)議：

推薦材料和試劑

VitroGel STEM

干細胞培養(yǎng)基（mTeSR‐PLUS, StemFlex, mTeSR‐1, Essential 8, NutriStem hPSC 等）

Y‐27632（10 mM/mL）

VitroGel 細胞回收溶液（產(chǎn)品編號 MS03‐100）（可選）

40、70 或 100 µm 可逆篩網(wǎng)（可選）

細胞解離溶液（可選）

圓錐形管（15 mL 或 50 mL）

血清學吸管

細胞培養(yǎng)容器（孔板、T 瓶、Erlenmeyer 燒瓶）

注意：VitroGel STEM 與多種培養(yǎng)容器兼容，用于在靜態(tài)懸浮培養(yǎng)中生長干細胞。根據(jù)每個實驗室所需的培養(yǎng)規(guī)模和可用系統(tǒng)，可能需要針對不同細胞類型優(yōu)化培養(yǎng)體積。

設備:

生物安全柜（II級）

CO2 培養(yǎng)箱（37°C，5% CO2 和 95% 濕度）

離心機

移液管

旋轉搖床、攪拌式反應器或低速生物反應器（10-40轉/分鐘，可選）

參考數(shù)據(jù):

圖1。二維基質培養(yǎng)hPSC的三維懸浮培養(yǎng)

如圖1所示，24小時后，小的hPSC球體開始形成。從第1天到第6天，懸浮培養(yǎng)物中的細胞迅速生長，導致健康的

以及高質量的干細胞球體。第3天，細胞數(shù)量急劇增加（圖1B），球體大小穩(wěn)步增加（圖1C）。hPSC球體顯示

淺坑或麻點的特征，指示hPSC標志物的表達，以及健康和高質量干細胞球體的成功擴增。這個

這些球體為研究人員提供了大量健康的hPSC，用于進一步的實驗

TheWell Bioscience公司專注于3D細胞培養(yǎng)產(chǎn)品，為細胞再創(chuàng)體內(nèi)生長環(huán)境。VitrogelTM3D 細胞培養(yǎng)水凝膠為無動物源性多糖水凝膠體系，模仿天然細胞外基質環(huán)境，可用于懸浮細胞和貼壁細胞的培養(yǎng)，為體內(nèi)和體外研究提供共通的操作平臺。

VitroGel STEM(生化試劑)VitroGel STEM(生化試劑)