酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理：

該檢測基于夾心ELISA技術，其中一種針對組裝好的AAV衣殼上的構象表位的單克隆抗體（mab）被包被在板上，并用于捕獲樣本中的AAV顆粒。

捕獲的AAV顆粒的檢測是一個兩步過程。

生物s偶聯(lián)的mab與捕獲的AAV顆粒結合。

鏈霉親和素過氧化物酶結合物與生物s分子反應。加入底物后會產生顏色反應，該反應與特異性結合的病毒顆粒的數量成正比。

AAV定量方法比較：

每種常用的定量方法都有其優(yōu)缺點：

定量PCR（qPCR）廣泛使用，但存在樣本制備、引物設計或PCR效率等問題，可能導致實驗室間結果的高變異性。

數字滴液PCR方法克服了qPCR的一些限制。然而，由于不同的樣本處理協(xié)議，實驗室間的差異仍然可能發(fā)生。

斑點印跡是一種簡單且定量的方法，如果使用可靠的參考材料。然而，它受到一般西方印跡法線性和動態(tài)范圍有限的影響。

鑒于上述技術的實用缺陷，傳統(tǒng)的夾心ELISA目前在實驗室間和實驗室內變異性以及易用性方面似乎更y越。因此，它代表了可靠和可重復定量總rAVV衣殼滴度的最佳格式。

使用重組/突變AAV：

重組/突變AAV載體的識別取決于受重組/突變影響的特定衣殼區(qū)域。PROGEN的AAV ELISA中使用的捕獲抗體結合特定且在某些情況下定義明確的構象表位。這些表位是由相應AAV血清型的衣殼組裝產生的。ELISA可能識別您的重組/突變AAV載體的第一個跡象是抗體結合表位的存在。然而，衣殼蛋白的蛋白質序列的變化也可能影響蛋白質的構象，因此影響AAV衣殼上呈現的表位的構象。這可能影響抗體的結合親和力，并影響基于AAV ELISA試劑盒提供的（非重組）試劑盒對照的滴度測定。由于這些特性強烈依賴于特定的重組/突變，PROGEN不能保證成功和精確定量您的重組/突變AAV載體。即使重組/突變AAV衣殼上仍然存在抗體結合表位，您的檢測也需要針對您的特定AAV載體進行測試和優(yōu)化。

PROGEN強烈建議生產和校準合適的（重組/突變）試劑盒對照，以確保使用PROGEN ELISA試劑盒可靠地確定您個別重組/突變AAV載體的滴度。

作為PROGEN在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦PROGEN熱銷產品AAV2 滴度檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

AAV2 滴度檢測試劑盒：

數量96次測試

反應性 AAV2

儲存 2-8°C

用途 僅供研究使用

應用 ELISA

產品描述 d特的微孔板酶免疫測定，用于定量AAV2的病毒粒子和組裝好的空衣殼。捕獲抗體檢測到的構象表位不存在于未組裝的衣殼蛋白上。

試劑盒對照/標準 AAV2的空衣殼制劑

供應形式試劑盒，12 x 8孔條狀包裝

AAV2 滴度檢測試劑盒特點：

AAV2衣殼定量ELISA

完整和空AAV2衣殼的檢測

A20抗體用作捕獲和檢測抗體

文獻參考：

Hamann,M.V.et al.Improved targeting of human CD4+Tcells by nanobody-modified AAV2 gene therapy vectors.PLoS One 16,(2021).

Satkunanathan,S.,Thorpe,R.&Zhao,Y.The function ofDNA binding protein nucleophosmin in AAV replication.Virology 510,46-54(2017).

Lock M,McGorray S,et al.Characterization ofa recombinant Adeno-Associated Virus Type 2 referencestandard material;Hum Gene Therapy 21:1273-1285 (2010).

Lochrie,M.A.et al.Mutations on the External Surfaces ofAdeno-AssociatedVirus Type 2 Capsids That AffectTransduction andNeutralization.J.Virol.80,821-834 (2006).

Kells,A.P.et al.AAV-mediated gene delivery of BDNF orGDNF is neuroprotective in a model of Huntington disease. Mol.Ther.9,682-688(2004).

Grimm,D.et al.Titration of AAV-2 particles via a novelcapsidELISA:packaging of genomes can limit productionof recombinant AAV-2.Gene Ther.6,1322-30(1999).

PROGEN公司成立于1983年，總部位于德國海德堡，由海德堡大學教授聯(lián)合創(chuàng)辦，體外診斷試劑的制造商和供應商，也是德國癌癥研究中心的合作伙伴。 主要產品線： 經過質檢驗證的抗體、體外診斷產品、抗體噬菌體展示技術、密度梯度分離液和AAV(腺相關病毒）檢測試劑盒等。

作為PROGEN在中國的經銷商，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的PROGEN以及客戶訂制化服務。歡迎大家隨時聯(lián)系我們。

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