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詳細介紹
細胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0904培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細胞系來源于一無精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1：
2傳代；5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0904培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-ZNF300 /FITC 熒光素標記鋅指蛋白300抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
DRD3 receptor(dopamine D3 receptor) 多巴胺受體-D3抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
膜粘連蛋白A1抗體 Anti-ANXA1/P35 0.1ml
ZBTB8B 英文名稱： 鋅指蛋白916B抗體 0.2ml
DCAMKL1 英文名稱： 絲酸/蘇酸蛋白激酶DCAMKL1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser104/106) 磷酸化雌激素受體α抗體 規(guī)格 0.1ml
DRD3 receptor(dopamine D3 receptor) 多巴胺受體-D3抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
UPAR 小鼠凝血酶受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-FasL 兔抗FasL抗體。Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
MYOG(Human myogenin) ELISA Kit 人肌細胞生成素 96T
SOCS7 英文名稱： 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子7抗體 0.1ml
phospho-CTBP1 (Ser422) 英文名稱： 磷酸化C端結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
Anti-FasL 兔抗FasL抗體。Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠含STIP1同源物U-框蛋白1(STUB1)ELISA試劑盒，英文名：STUB1 ELISA Kit人AP-1復(fù)合體亞基mu-1(AP-1 complex subunit mu-1)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠載脂蛋白A1(Apo A1)ELISA試劑盒，英文名：Apo A1 ELISA KiISA Kit for Human Angiopoietin-related protein 4小鼠雄烯二酮(ASD)ELISA試劑盒，英文名：ASD ELISA Kit人精氨酸酶1(Arginase-1)ELISA試劑盒人96T3.12-200 ng/mL小鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)ELISA試劑盒，英文名：Eotaxin 2/CCL24 ELISA KiISA Kit for Human Angiotensin-converting enzyme小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒，英文名：eNOS ELISA KitN(6)羥甲基賴氨酸(N(6)-Carboxymethyllysine)ELISA試劑盒通用96T0.78-50 ng/mL小鼠巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒，英文名：MIP-5 ELISA KiISA Kit for Human C-X-C chemokine receptor type 7小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)ELISA試劑盒，英文名：ALP-B ELISA Kit
人熱休克因子1(HSF-1)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠膽囊收素八肽(CCK8)ELISA試劑盒，英文名：CCK8 ELISA Kit人T細胞表面糖蛋白CD3ε鏈（T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain）ELISA試劑盒人96T0.625-40 ng/mL小鼠雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶(SULT1E1)ELISA試劑盒，英文名：SULT1E1 ELISA KiISA Kit for Human Cathepsin D小鼠γ分泌酶(GACE)ELISA試劑盒，英文名：GACE ELISA Kit人可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒人96T0.25-16 ng/mL小鼠CC趨化因子受體6(CCR-6)ELISA試劑盒，英文名：CCR-6 ELISA KiISA Kit for Human C-C motif chemokine 4小鼠白細胞介素7(IL-7)ELISA試劑盒，英文名：IL-7 ELISA Kit人Deltex同源物1(DTX1)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠著絲粒蛋白H(CENPH)ELISA試劑盒，英文名：CENPH ELISA KiISA Kit for Human Eosinophil peroxidase小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT1)ELISA試劑盒，英文名：CT1 ELISA Kit
人煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH) ELISA Kit 人煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 96T
Sumo 3 英文名稱： 泛素樣蛋白Sumo3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格 0.1ml
NGF 小鼠神經(jīng)生長因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
C1orf201 英文名稱： 1號染色體開放閱讀框201抗體 0.2ml
Anti-human Fibrinogen 人纖維蛋白原抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
TIMP-3 ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-ANGPTL4/ANG-4 /FITC 熒光素標記血管位蛋白樣4/血管生成素樣蛋白-4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh FAP/FAPA 成纖維細胞激活蛋白α抗體 規(guī)格 0.2ml
A Beta1-42 ELISA Kit 大鼠β淀粉樣蛋白1-42 96T
n-Myc 英文名稱： 致癌基因n-Myc抗體 0.1ml
ANAPC1 英文名稱： 細胞周期末期促進復(fù)合蛋白APC1抗體 0.1ml
Anti-ANGPTL4/ANG-4 /FITC 熒光素標記血管位蛋白樣4/血管生成素樣蛋白-4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
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