詳細介紹
細胞名稱 人肝癌細胞;HepG2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一15歲男性白人的肝細胞癌組織。模式染色體數為55條,有一條重排的1號染色體。此細胞對裸鼠沒有致瘤性。未檢測到HBV的基因組。
培養(yǎng)條件 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代;3-4天一次
傳代情況 PN3
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR Amelogenin:XY;CSF1PO:10,11;D13S317:9,13;D16S539:,13;D18S51:13,14;D19S433:15.
人肝癌細胞;HepG2培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Phospho-RCC1 (Ser11) /FITC 熒光素標記磷酸化染色體濃縮調控蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ADM (Adrenomedullin)ProAM-N20 Rat, human, mo, pig, dog, bov 腎上腺髓質素蛋白(N端20肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
層粘連蛋白抗體 Anti-LN 0.2ml
SIGLEC9 英文名稱: 唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素9抗體 0.2ml
FAM50B 英文名稱: FAM50B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PKR (Thr446) 磷酸化蛋白激酶R抗體 規(guī)格 0.1ml
ADM (Adrenomedullin)ProAM-N20 Rat, human, mo, pig, dog, bov 腎上腺髓質素蛋白(N端20肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
sCD30L(Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand) ELISA Kit 人可溶性CD30配體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-GLUT3 葡萄糖轉運蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格 0.1ml
sVE-Cadherin (Human Vascular Endothelial-Cadherin Complex) ELISA Kit 人血管內皮鈣粘著蛋白復合體 96T
RPUSD2 英文名稱: RNA尿苷酸合酶結構域蛋白2抗體 0.2ml
Phospho-CHK2 (Thr387) 英文名稱: 磷酸化細胞周期檢測點激酶2抗體 0.1ml
Anti-GLUT3 葡萄糖轉運蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1) 壞死因子α誘導蛋白1抗原 0.5mg
IL1RAPL1 英文名稱: 白介素1受體相關蛋白樣1前體蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh CESK1 分子伴侶CESK1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Caspase-9/FITC 熒光素標記白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh TLR3 Toll樣受體3抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-DcR2/CD264 /FITC 熒光素標記抗誘捕受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Casp-3 ELISA Kit 大鼠胱天蛋白酶3Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-TRP1/gp75 酪氨酸酶相關蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GHRF/GHRH 生長激素釋放激素抗體 規(guī)格 0.1ml
AT ELISA Kit 大鼠抗胰蛋白酶 96T
Neurokinin A 英文名稱: 神經激肽A抗體 0.1ml
ART3 英文名稱: 二磷酸腺苷核糖基轉移酶3抗體 0.2ml
Anti-TRP1/gp75 酪氨酸酶相關蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。