化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
?方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人乳腺上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人乳腺上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人乳腺上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 乳腺組織 |
英文名稱 | Human Mammary Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7073 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
人乳腺上皮細(xì)胞分離自乳腺組織；乳腺是復(fù)管泡狀皮膚腺，主要由腺上皮細(xì)胞組成，并具有特殊的泌乳功能。在妊娠期，導(dǎo)管末梢發(fā)育成腺泡；近年來的許多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細(xì)胞（MEC）有密切聯(lián)系，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開展的關(guān)鍵步驟。乳腺是乳房的腺體組織，乳腺由導(dǎo)管和腺泡組成，腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常發(fā)育是由體內(nèi)激素和局部合成的生長因子共同調(diào)控，其中乳腺表達(dá)的生長因子對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的增殖、分化、凋亡產(chǎn)生極大的影響。乳腺上皮細(xì)胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織，為貼壁生長型細(xì)胞，呈多角形、圓形以及短梭形；乳腺上皮細(xì)胞主要功能即生乳功能。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品：
雪羊皮膚細(xì)胞;SSHS1 | EMA IgA ELISA Kit 大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgAMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
C1orf135： 1號(hào)染色體開放閱讀框135抗體 0.2ml | Glu-Glu Tag： Glu-Glu tag抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh CENPB 著絲粒蛋白B抗體 規(guī)格 0.2ml | PCDHA1： 原鈣粘附蛋白α1抗體 0.2ml |
Anti-NOS-2/iNOS/FITC 熒光素標(biāo)記合成酶-2抗體(誘導(dǎo)型)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | phospho GAP-43(pSer41)(phospho Growth associated protein 43 ) 0酸化生長相關(guān)蛋白43抗原 0.5mg |
Goat Anti-human IgA/Gold 金標(biāo)記羊抗人IgA(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml | 5 MethylCytosine： 5甲基胞嘧啶抗體 0.1ml |
VCL Others Human 人 VCL / Vinculin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | NHEK-c adult 正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(NHEK)成年單一捐獻(xiàn)者 500,000cells 原代骨細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml |
人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHCPEC cDNA | CDK7 & CCNH & MNAT1 Others Human 人 CDK7 & CCNH & MNAT1 Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人羊膜細(xì)胞;WISH SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系 Human | CADM3 Others Rat 大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(HPAEC) ( 5×105 ) rCSC, 大鼠心肌細(xì)胞 Rattus | HT-29細(xì)胞，人結(jié)腸癌細(xì)胞 人胚腎細(xì)胞,293細(xì)胞 腎系膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105次方(1ml) |
T-112乳蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL | 人乳腺上皮原代細(xì)胞PCDHA1： 原鈣粘附蛋白α1抗體 0.2ml |
HNE2-LMP1細(xì)胞，人鼻咽癌細(xì)胞系 小鼠肝癌細(xì)胞,Hepa 1-6細(xì)胞 CM-H079人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 人間充質(zhì)干細(xì)胞(脂肪)cDNAHMSC-ad cDNA |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1022 | TSPAN31 Others Human 人 TSPAN31 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
Promocell C-22170 Myocyte GrowthMedium KIT, 心肌細(xì)胞生長培養(yǎng)基套裝 500ml | Anti-Il-7R a/CD127 /FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-7受體a抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-ROCK2 Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CM-H123人小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
Rhesus antibody Rh Phospho-GRB10 (Tyr67) 0酸化生長因子受體結(jié)合蛋白10抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KLHDC8A KLHDC8A蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
CD3(Rat Cluster of differentiation 3,CD3) ELISA Kit 大鼠CD3分子 96T | VCL Others Human 人 VCL / Vinculin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
化工儀器網(wǎng)