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            其它類ELISA試劑盒步驟與原理

            閱讀:894          發(fā)布時間:2020-9-23

            其它類ELISA試劑盒操作步驟:

            1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

            2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

            3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

            4、甩去孔內液體,每孔其它類ELISA試劑盒加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

            5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

            6、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

            7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

            8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

            9、在450nm波長處測定各孔的OD值。局限

            10、6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。

            其它類ELISA試劑盒技術原理:

            (1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

            (2). 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

            (3). 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。

            (4). 此時固相上的酶量與標本其它類ELISA試劑盒中受檢物質的量呈一定的比例。

            (5). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。

            (6). 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關, 

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