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其它源細(xì)胞原代細(xì)胞與傳代培養(yǎng)
閱讀：206 發(fā)布時(shí)間：2020-12-2其它源細(xì)胞原代培養(yǎng)：
1、取約500mg脂肪組織（自外科手術(shù)患者的皮下獲?。?，再將脂肪組織一次擠壓進(jìn)入準(zhǔn)備好的15m離心管中，每個(gè)離心管中的組織不超過5ml。
2、吸取緩沖液PBS7ml加入到上述裝有組織的離心管中，用吸管吹打10~20次，然后靜置1min左右，用吸管將組織下層的液體吸出。如此反復(fù)直到所吸出的液體呈透明狀，不帶有血細(xì)胞為止。
3、向有其它源細(xì)胞的試管中加入與組織量相同大約5ml左右的消化液（胰酶0.25%，I型膠原酶0.1%以1：1比例混合配制而成），將試管密封，放入37°C恒溫?fù)u床中，190r/min，震蕩消化30min。此時(shí)液面分為3層，上層為黃色油狀脂肪細(xì)胞層，中層為脂肪組織層，下層為含單個(gè)核細(xì)胞的液體；
4、吸出離心管中的下層液體移入含*培養(yǎng)基（含10%胎牛血清的高糖DMEM）的新離心管中終止消化，然后將離心管封閉，1500rpm離心10min。
5、用吸管吸取上清后去掉，加入1ml培養(yǎng)基，輕輕吹打10~20次制成細(xì)胞懸液，將各個(gè)離心管中的胞懸液收集起來，接種待用。
6、在剩余脂肪中加入新的胰酶和膠原酶，重復(fù)以上步驟繼續(xù)消化，重復(fù)2-3次，將收集到的有核細(xì)胞按照一定的密度接種到培養(yǎng)瓶中，放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
7、次換液：大約12-24小時(shí)后，觀察細(xì)胞貼壁即可進(jìn)行次換液，此后每隔3天換液，待細(xì)胞生長(zhǎng)至融合后進(jìn)行傳代。
其它源細(xì)胞傳代培養(yǎng)：
1、在超凈工作臺(tái)內(nèi)吸去培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的舊培養(yǎng)基，加PBS沖洗2-3次，之后加入1-2mL消化液（0.25%胰酶和0.04% EDTA(v/v 1:1)）。
2、培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行消化（3-5min），倒置顯微鏡下觀察其它源細(xì)胞形態(tài)變化，當(dāng)貼壁的脂肪干細(xì)胞胞回縮，細(xì)胞間隙不斷增大，細(xì)胞呈近球形同時(shí)有少量圓形細(xì)胞脫壁時(shí)，加入等體積的培養(yǎng)基終止消化。
3、用吸管反復(fù)有序輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞（動(dòng)作要輕柔，注意不要產(chǎn)生氣泡），使細(xì)胞脫離瓶壁后呈單細(xì)胞懸液。
4、將單細(xì)胞懸液移至離心管中，離心，(1000rpm,5min)，棄上清，加入*培養(yǎng)基，輕吹使之松散，按1:2傳代培養(yǎng)。
其它源細(xì)胞干細(xì)胞：
干細(xì)胞是具有自我復(fù)制和多向分化潛能的原始細(xì)胞，是生命的其它源細(xì)胞，是形成人體各種組織器官的原始細(xì)胞。干細(xì)胞技術(shù)是生物治療的前沿技術(shù)，稱之為再生醫(yī)學(xué)。干細(xì)胞是具有自我復(fù)制和多向分化的原始細(xì)胞，是機(jī)體的起源細(xì)胞，是形成人體各種組織器官的原始細(xì)胞。
干細(xì)胞是一類具有自我更新能力的多潛能細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞或組織器官，醫(yī)學(xué)界稱其為"萬用細(xì)胞"。干細(xì)胞是指尚未分化的細(xì)胞，存在于早期胚胎、胎盤及其附屬物、骨髓、外周血和成年組織中，它能夠被培養(yǎng)成肌肉、骨骼和神經(jīng)等200多種人體細(xì)胞、組織和器官。干細(xì)胞技術(shù)的作用就是:能再造一種全新的、正常的甚至更年輕的細(xì)胞、組織和器官。