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標泛素羧基末端水解酶11ELISA試劑盒檢測程序
閱讀：149 發(fā)布時間：2019-3-18| 提 供 商 | 上海撫生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 64KB |
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標泛素羧基末端水解酶11ELISA試劑盒檢測程序：
在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議，所有樣品和標準來測定1。準備好所有試劑，工作標準和樣品在前面的章節(jié)中。
2。請確定井數(shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表。
3.每孔加入100μl的標準和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時，在37℃下一盤布局記錄標準和樣4。每孔中取出的液體，不洗。
5。向每孔中加入100μl生物素抗體（1倍）。蓋上一個新的膠粘帶。孵育1小時，在37℃下（生物素抗體（1X）可能會出現(xiàn)混濁。預熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）
6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干7。向每孔中加入100μl的HRP-抗生物素蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個新的粘接劑條。溫育1小時，在37℃下
8。重復的愿望/洗滌過??程中，在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光
10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動酶標板，以確保充分混合。
11。在5分鐘內(nèi)，設置至450nm，使用酶標儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接，可能會比較高，不太準確。
標泛素羧基末端水解酶11ELISA試劑盒原理：
此法采用定量夾心酶聯(lián)免疫技術?？贵w具體為USP11已經(jīng)被預先涂到微孔板。標準和樣品吸入井和USP11目前的固定抗體的約束。生物素共軛的抗體特異性USP11除去任何未結(jié)合的物質(zhì)后，加入到孔中?？股锼氐鞍坠曹椀睦备^氧化物酶（HRP）的洗滌后，加入到孔中。經(jīng)過洗滌，以除去任何未結(jié)合的抗生物素蛋白的酶試劑，底物溶液加入到孔中，并顏色發(fā)展成比例的量的初始步驟中USP11綁定。彩色顯影被停止并測量的顏色的強度。